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血浆D-二聚体(D-dimer，DD)是纤维蛋白单体经过活化因子交联后，再经过纤维溶解酶水解所产生的一种特异性降解产物，其水平的升高反映高凝状态和继发纤溶亢进，DD的含量变化可以作为体内高凝状态和纤溶亢进的分子标志物之一。DD反映出的特异性并不是指在某一种特定的具体疾病中的表现，而是针对有凝血和纤溶过程的这一大类疾病的共同病理特点，因此DD在临床检验中应用的十分广泛，现就将D-二聚体近年来的临床应用综述如下： 1 D-二聚体检测方法 1.1 自身红细胞凝集法 采用分别针对DD和红细胞上表位的双抗体，当血中DD水平升高时，抗原一抗体结合的增多而导致红细胞凝集，2min内可以判断结果，为半定量的自身红细胞凝集试验。其优点是可在全血中检测，省略了离心制备血浆的步骤［1］。 1.2 乳胶凝集法 1983年Rylat等将分离纯化的D-聚体作抗原，按常规方法筛选，最后获得一株DD-3B6／22的抗D-聚体的单克隆抗体。1986年Elms将此单克隆抗体共价吸附在乳胶颗粒上，用于定性或根据其稀释度半定量测定标本中的D-二聚体的含量。标本可采用肝素EDTA或枸椽酸钠抗凝血浆，室温下可稳定3d，4℃可保存2周。Hillyard用该法测定了515例未经选择的健康志愿者枸椽酸钠抗凝血浆，其中97．7％均为阴性与ELISA比较显著相关，认为该法快速、特异、操作简单。不需特殊设备，特别适用于急诊测定［1,2］。 1.3 酶联免疫吸附法(ELISA) 1983年Rylatt和Elms建立了双抗夹心的ELISA法检测血浆中的D-二聚体。其包被抗体和酶标抗体均采用分离纯化后筛选出来的McAb(DD3B6／22)，该McAb能特异性地针对D-二聚体中的r′-r′连结键。该法灵敏度10μg/L，正常范围<300μg/L［5］。1999年欧洲心脏病学会急性肺动脉栓塞诊断和治疗指南中推荐用ELISA方法检测D-二聚体，检测上限可达400ug／L，ELISA方法检测D-二聚体不受胆红素、血红蛋白、纤维蛋白原、FDP干扰，因此更精确，敏感性更高［4］。但操作要求严格费时，每次均需同时做标准曲线，不适于单个标本的测定。 1.4 基于酶免疫法的荧光抗体检测法 VIDAS DD在VI—DAS免疫分析仪上进行，其在酶免疫法基础上与荧光检测相结合。利用现成的单剂量试剂和分析仪中储存的校准系统，对单份样本进行检测。现成试剂由包被了鼠抗D-D单抗的固相移液装置和一试剂条组成，后者包含了其他所需试剂：结合剂(碱性磷酸酶标记的鼠抗D-D单抗)、洗涤剂、样品稀释剂和底物。将200μL血浆吸入试剂条后，所有步骤由分析仪完成。除需将血样常规离心15min外，结果可在35min内得到。结果以纤维蛋白原等价单位表示，其检测上限为1000μg/L，下限为50μg/L，低于正常参考值下限(68μg/L～494μg/L)。对下肢深静脉血栓形成(DVT)的敏感性为96％～99％。VIDAS DD是目前研究最多的一种检测方法，敏感性很高，与经典ELISA法有很好的一致性，最有希望取代经典ELISA法而成为DVT诊断的首选筛选试验［1］。 1.5 免疫金标法 Gogstad用胶体金标记D-二聚体的单克隆抗体，建立了免疫过滤金标染色测定法。本法将单抗吸附在多孔薄膜并粘放在有多层吸收垫的塑料盘上，被检标本加入后即与该抗体相结合，然后加入胶体金标记的抗体，在薄膜上产生红色斑点。通过肉眼观察或用折射仪读数。与提供的标准色价或者测定标准品的折射读数，可计算出标本中D-二聚体的含量。该法既具有胶乳凝集法的操作简单、快速，适用于急诊测定的优点，又具有ELISA能够准确定量的特点，线性范围达到10mg／L，与ELISA比较具有显著的相关性，不受胆红素，Hb、纤维蛋白原、可溶性的纤维蛋白及FDP等干扰，但对类风湿因子、肝素及脂血等有一定的干扰。［1,2］ |