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摘要：目的了解ELISA操作过程中温育和洗涤方式对测定结果的影响。方法以为例将样本应用样本分配仪加入微孔板，然后将通过不同的温育、洗涤方式、处理后检测样本的吸光度（A）值。结果全自动酶标仪和手工洗涤方式测定的低值阳性标本有显著性差异（P<001）；37℃干式温箱温育和37℃水浴结果没有明显差异。结论全自动酶标仪一体化检测效果为佳；温育方式对实验无明显干扰；如果对实验各环节进行标准化，排除潜在的影响因素，可以最大限度地降低检测的系统误差，以保证ELISA检测有较好的准确性。
关键词：ELISA；温育；洗涤
临床常用ELISA法进行HBV-M的检测作为判断乙肝病毒感染、传染及愈后的指标。因操作简便，费用低廉，在临床实验室应用极为广泛。但影响ELISA结果的因素较多，如试剂、全自动设备、手工检测、操作步骤、反应的温度、洗板的方式和显色时间长短等等［1］。本文以测定为例，讨论温育和洗涤方式对ELISA法检测结果的影响。
资料与方法
1材料
（1）样本来源随机收集门诊乙肝病人高值阳性血清、低值阳性血清和阴性血清。0.5ng/mlHBsAg临界值血清购自卫生部临检中心。
（2）试剂HBsAg酶联免疫试剂盒购自。
（3）仪器瑞士TECAN公司RSP 100全自动加样仪；德国DADEBEHRING公司BEP III全自动酶标仪。
2方法
温度和洗板方式准备8块微孔板，所有加样由RSP100全自动加样仪完成，每板阴性血清、低值血清和高值血清交叉加样各24孔，按标准操作规程进行ELISA操作，测定波长450nm，参考波长650nm。
①将第一块微孔板移入BEPIII全自动酶标仪，检测步骤参照试剂说明书编程由仪器自动完成。
②将第二块和第三块微孔板置37℃水浴温箱温育1h，人分别以洗液定量和非定量方式手工洗板，分别测定吸光度值。
③将第四、五、六块板分别放置10℃、25℃、37℃温育1h，洗板和比色由BEPIII全自动酶标仪完成。
④将第七块和第八块微孔板分别置37℃干式温箱和37℃水浴式温箱温育1h，然后由BEPIII全自动酶标仪洗板。
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