检测HBV的血清学方法有很多,目前,ELISA操作最简单,易于推广。近几年来,我们在工作中遇到几例单HBeAg阳性或HBeAg、抗—HBe同时阳性的特殊模式,将标本作如下处理后:重新离心,冰箱保存,复查,发现结果均为阴性。另外也有研究者报道HBeAg、抗—HBe同时阳性的特殊模式[1],以及溶血及脂浊样品对ELISA检测的影响[2],基于上述这些现象,我们进行如下探讨。
1 材料和方法
1.1 实验仪器 BIORAD Model 550酶标仪,BIORAD Model 1575洗板机,北京医用离心机厂LDZ5—2型离心机,美国PE公司PE480 DNA扩增仪。
1.2 标本 枸橼酸抗凝标本。
1.3 试剂 科华公司和华美公司HBeAg试剂盒,新创HDVIgM试剂盒,HBVDNA试剂盒。
1.4 方法 严格按照试剂盒说明书操作。
1.4.1 枸橼酸抗凝标本45份混匀不离心和3000离心5min、10min,分别用科华和华美试剂同时进行检测。
1.4.2 结果判断样品OD值/阴性对照,OD值>2.1为阳性,否则为阴性。
1.4.3 45例标本作HDVIgM检测,同时作HBVDNA检测。
2 结果
表1 45份枸橼酸抗凝标本两种试剂离心与不离心检测结果
2.1 对45例标本作HDVIgM检测,结果为阴性。
2.2 对45例标本作HBVDNA检测,结果为阴性。
3 讨论
3.1 HDV是缺陷病毒,当HDV和HBV重叠感染,HBV为HDV复制提供HBsAg[3],故能表现HBsAg阴性而HBeAg阳性的情况。通过对HDVIgM测定结果表明,单独HBeAg阳性与HDV重叠感染无关。
3.2 HBeAg存在于乙肝病毒Danna颗粒的核心部分,HBeAg存在表明HBV处于增殖和复制状态,具有强烈的传染性。通过对HBVDNA的检测结果为阴性,表明体内并无HBVDNA[4],故我们认为出现的HBeAg为假阳性。
3.3 HBeAg是前C区基因区表达,同时HBcAg在C区基因区表达[5],HBeAg的纯化是产生纯抗-HBe的前提,故在包被过程所用抗—HBe不纯可能是造成假阳性的原因之一。
3.4 全血中有许多HBeAg的共同抗原类的颗粒物质,在不离心的情况下悬浮在血浆中,故在酶免过程中出现非特异性结合而造成假阳性[6];另外可能血中存在许多SOD酶,在洗涤过程中不清而在显色过程中出现非特异性反应造成假阳性,同行也有类似报道[7]。
3.5 HBeAg阳性是反应HBV增殖、有传染性的一种有意义的指标之一,在排除HBsAg勾带反应,HDVIgM阳性,HBVDNA阳性情况下,单独出现这样的结果需慎重报告。
3.6 血清中的细胞成分中含有过氧化酶成分,产生辣根过氧化物酶样作用,当离心不充分的血清、血浆标本加养于反应板孔时,细胞成分粘附于酶标板而不能洗去,会产生酶促反应而呈现阳性显色,导致出现一些假阳性[8]。
【参考文献】
1 王火生,韩红星,徐六妹,等.HBV e 系统双阳模式复核结果的分析\[J\].临床检验杂志,2001,19(6):381
2 单桂秋,苏建婷.溶血及脂浊样品对ELISA检测HBsAg的影响\[J\].临床检验杂志,1999,17(2):102
3 李梦东主编.实用传染病学\[M\].北京:人民卫生出版社,1998.136
4 李梦东主编.实用传染病学\[M\].北京:人民卫生出版社,1998.137
5 俞树荣主编.微生物和微生物学检验\[M\].北京:人民卫生出版社,1997.380
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