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3 LP(a)的检测方法 LP(a)的检测方法基本为免疫学方法，从60年代来不断改进和完善。LP(a)的结构特性决定了它具有以下免疫学特点：（1）含有两种抗原蛋白质apo(a)与apoB100，其中apo(a)与plg有高度同源性，故全范围的多克隆抗LP(a)的抗血清既能与apoB又能与plg进行交叉免疫反应。（2）LP(a)的分子量大，且apo(a)有重复37次以上的Kringle4区域，故LP(a)的抗原性强，且较稳定。（3）LP(a)中apo(a)位于表面，且与脂质成分无交联，与apoB100也只以一个二硫键相连，故apo(a)暴露充分。（4）LP(a)中apo(a)是结构复杂的糖蛋白，因其糖化程度及Kringle4拷贝数目不同而呈现分子由300kD到800kD的多态性[10]。 最初的LP（a）测定法为Berg提出的琼脂凝胶扩散法，其后Laurell在60年代中期提出了单向火箭电泳两种方法。其间国外又有多种报道[10]，如放射免疫扩散法（RID），免疫散射比浊法（INA）等多种方法。但都有各自缺点（RID较不敏感，变异大，INA适用范围窄且需专门激光比浊仪等设备）而没有推广应用。直到80年代中、后期出现了放射免疫测定法（RIA），免疫透射浊度法（ITA）和酶联免疫吸附法（ELISA）等。这同种方法都有敏感性高，线性范围广（5～800mg/dl），变异小（组间、组内CV＜10％）等优点。但RIA法需专门核医学设备及放射性同们素标记而应用受限。ITA虽然精密度高，适宜大批量标本测定，但由于不易得到高活性的、纯化的多克隆重抗体血清，及常用的PEG反应体系中明显的非特异反应。而使本法推广受到限制[11]。而ELTSA法则以其灵敏度高、特异性好、方便、易自动化等诸多优点，而被广泛应用。大多数ELISA基于双抗夹心法，即（抗）LP(a)IgG→抗原（等测样本或标准）＋酶标（抗）LP(a)IgG→底物显色。所用抗血清可为单克隆或多克隆抗体。在应用ELISA法定量测定LP（a）及分析结果时应注意以下几点： （1）避免免疫交叉反应：粗制抗LP（a）抗体与apoB及plg抗原都存在明显的交叉反应。为精确定量LP（a）可使用以下和种高特异性方法：①应用单克隆抗体。但考虑到apo(a)的高度多态性，此法可有低估抗原浓度的危险[10]。②采用抗apo(a)—LP(a)-抗apoB法，此法可有效避免与plg的交叉反应，但对血浆中少量游离apo(a)可漏检[12]。③多克隆抗血清纯化，即采用含有plg，LDL等可能与未纯化的抗血清发生交叉反应的多种抗原的层析柱来纯化粗制抗血清，以得到高特异性的抗apo(a)多克隆抗体[10]，此法目前应用较广。 （2）LP（a）标准：标准问题为质量控制中的首要问题。但目前国际尚无统一的LP（a）标准，所以只能尽量做好室间质控和室内质量评价[13]。可使用纯化LP（a）为标准，以蛋白定量计；也可用测定LP（a）胆固醇的量乘以3.3[LP(a)中含有29.8％的胆固醇]来标定； 也可在室内自制参考血清作为常规检测的第二标准。 （3）结果分析：大量研究显示人群血浆中LP（a）浓度呈明显偏态分布，故一般不宜用正态分布的检验方法。可用对数或平方根转换等变为正成分布资料后，再用正态分布的检验方法；也可用非正态分布的非参数统计检验方法（如秩和检验等）；也可考虑用四分位数或几何均数对偏态数据进行描述。 （4）标本储存：通常LP（a）血浆标本在-20℃时可存放6个月而无明显的免疫原性改变。但有研究表明脂蛋白或载脂蛋白抗原血清标本的免疫原性随储存温度的增高，存放时间的延长而增加，故需长期贮放（6个月以上）标本时，液氮速冻效果更好 |