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三、讨论
HLA基因分型技术目前已广泛应用于临床器官移植，但由于模板DNA的制备耗时太长，使之难以完全满足临床的需要。标准的酚-氯仿法是目前最常用、最可靠的方法之一，但该法耗时长，影响了临床应用。我们探索了几种抗凝血标本DNA模板的快速制备方法，发现煮沸法虽快捷(30分钟)，但结果不稳定，重复率不高；NP-40法和辛酸法则是理想的血液DNA模板快速制备的方法，所需时间分别为60分钟和20分钟，操作简单，所需试剂方便易得，结果稳定。通过对30份血标本DNA的提取，并与酚-氯仿法同步对比研究，所提取DNA的量和纯度与标准酚-氯仿抽提法相比无明显差异，DNA分子完整，无明显降解。3种方法提取DNA的HLA-DR基因分型结果一致。对分离出的淋巴细胞标本DNA的提取也同样获得满意结果。
尽管辛酸法较NP-40法更为快捷，但对冻存较久(1个月以上)的全血标本不如NP-40法稳定。因此，对新鲜血或淋巴细胞标本，我们多采用辛酸法，两者各有其特点，在临床检测中可结合使用。
本研究显示辛酸法和NP-40法可满足临床快速HLA基因分型的需要，不仅如此，本方法对所有血液DNA分子生物学的科研及临床检测项目均具有很广泛的应用价值。
作者：王晓波 曾文涛
单位：510080 广州，中山医科大学附属第一医院外科
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