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Coster等[16]研制出Bengal-15，10名志愿者服用一剂菌苗，每剂菌苗为108cfu（克隆形成单位）加于100ml缓冲液。3名志愿者只服用100ml缓冲液作对照。服苗者均未腹泻，其他病症与对照组一致，这表明其他病症是由缓冲液引起，菌苗对志愿者无不良反应。服苗后2周，10名服苗者中有9名的血清杀弧菌抗体阳性（超过对照8倍）。服苗后1个月，对7名服苗者进行攻击试验，3名服缓冲液者和3名未参与免疫者作为对照，每人服5×106cfuO139产毒株，6名对照中有5名发生霍乱样腹泻，7名服苗者中只有1人发生轻度腹泻。该菌苗保护率为83%，该菌苗为动力缺失株，但动力缺失未减低菌苗的定居能力和免疫原性。 Tackete等[16]研制出CVD112，给12名志愿者服用菌苗106-108cfu，6名服106cfu者均无腹泻和其他明显的症状，6名108cfu者中有3名轻度腹泻。服苗后1个月，12名服苗者中11名血清抗毒抗体阳性，11名外周血抗体分泌细胞（ASC）分泌针对肠毒素、脂多糖和荚膜多糖的IgA抗体，但12名血清杀弧菌抗体均为阴性。分析认为可能是O139的荚膜多遮住了脂多糖，影响了针对脂多糖的杀弧菌试验。服苗后5周，对8名服苗者进行攻击试验，以15名未服苗者作对照，每人服108cfuO139产毒株，15名对照中有12名发生霍乱样腹泻，8名服苗者中只有1人发生轻度腹泻，该菌苗保护率为84%。 Walder等[16]研制出Bengal-2。在研制中发现，用于研制该菌苗的O139菌株染色体基因组上有一62kb的耐药基因，经基因重组技术将耐药基因去掉，从而得到对抗生素敏感的减毒涶菌苗，其安全性和免疫性有待于在志愿者中验证。 基因工程减毒活菌苗，主要毒力缺失，保留保护性抗原，具有较好的免疫原性和保护力，服苗后8d内就产生显著的保护作用；但该类菌苗仍有一定的毒性，使少数接种者腹泻。许多野生型O139株对大量抗生素耐药，许多O139株存在一活跃的前噬菌体，有可能在O139减毒活菌苗株与外环境之间进行毒力基因的水平转移。上述问题限制了减毒活菌苗，尤其是O139群减毒活菌苗的应用，有待于在霍乱弧菌毒力分子遗抟学深入研究的基础上，对菌苗株继续改造[18]。 （三）基因工程加法菌苗 霍乱弧菌最主要的保护性抗原是脂多糖和霍乱肠毒素B亚单位，O139群还有荚膜多糖，将上述抗原基因克隆并转入载体，从而制成基因工程加法菌苗，可用于预防霍乱弧菌和载体菌感染。 Favre等[19]利用重组大片段DNA的质粒pSSV1215为载体，以大肠埃希菌（大肠杆菌）HB101为载体菌，成功地构建了O139群MO45株染色体基因文库。并筛选出能表达脂多糖和荚膜多糖的重组菌。经酶切分析，能同时表达脂多糖和荚膜多糖的重组片段约为37kb。 Favre等[19]利用上述重组片段研制出了O139群基因工程菌苗。将重组片段与插入质粒pSSV1209N重组。以CH19株为O139菌苗的载体，CH19株是O1群减毒8活菌苗CVD103-HgR脂多糖基因部分缺失的衍生株，可用于外源脂多糖基因的表达。插入质粒将携带的重组片段经同源重组插入CH19株的染色体中，是源位点为hlyA∷mer，最终得到O139群的脂多糖和荚膜多糖，并具有CVD103-HgR脂多糖以外的基因和表型特征。经51次传代，99.9%以上的克隆仍能表达O139脂多糖和荚膜多糖。经动物免疫，可诱导产生高效价的抗脂多糖和抗荚膜多糖的抗菌抗体及抗CT-B的抗毒抗体，故CH25有望作为预防O139群感染的口服活菌苗，其安全性免疫原性有待于进一步在志愿者中验证。 参考文献：略 |