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O139群的免疫机制与O1群的基本一致。抗菌免疫主要针对脂多糖和荚膜多糖，抗毒免疫主要是针对CT-B[13，14]。O139群比O1多一个表面抗原即荚膜多糖，在小鼠实验中发现，先给小鼠服用亚凝集剂量和抗荚膜多糖抗血清，再用O139群产毒株进行攻击，小鼠不发生腹泻，经进一步研究证明该抗体可抑制O139株在肠粘膜上定居。经家兔肠段结扎实验和小鼠攻击实验证明，在针对O139群以保护性免疫为主，以针对CT-B的抗毒免疫为辅，而且两者可以协同反应，增强保护作用。 三、目前研制出的O139群菌苗候选株 （一）口服灭活菌苗 Jertborn 等[15]在O1群单价口服灭活菌苗的基础上研制出O1群和O139群双价口服灭活菌苗。单价菌苗每剂含1.0mg经基因工程制备的重组CT-B，甲醛灭活的EVC iaba弧菌0.5×1011个，甲醛灭活的CVC Ogawa弧菌0.25 ×1011个，热灭活的CVC Inaba弧菌0.25 ×1011个,热灭活的CVC ogawa弧菌0.25 ×1011个。双价菌苗只是在单价菌苗中加入甲醛灭活O139群弧菌0.5×1011个。加入的O139群菌株能稳定地表达高水平的O139群脂多糖和甘露醇敏感的血凝质，不能够表达荚膜多糖。 在38名志愿者中检验双价菌苗的安全性和免疫原性。20名志愿者给予双菌苗，分隔2周给予2剂菌苗，其中12名在第2剂菌苗接种后5-6周接种第3剂菌苗，其余18名志愿者接种单价和双价菌苗。两组志愿者，服苗后的反应相似，70%-80%的志愿者无任何不适反应，20%-30%有轻度的反应，反应主要是轻度腹鸣。根据过去现场接种单价菌苗的经验，可推测引反应主要是由于服用了菌苗的碳酸氨钠缓冲液引起。 双价菌苗诱导的针对CT-B和O1群霍乱弧菌的血清反应的频度和大小，与单价菌苗结果一致，说明在双价菌苗中加入的O139群霍乱弧菌，并没有影响单价菌苗各成分的免疫原性。接种双价菌苗的志愿者中大多数能诱导针对O139群的肠道和系统抗菌免疫反应。收入12名双价菌苗接种者的血清，检测抗体，发现均产生显著增高的抗毒抗体IgA和IgG。10名产生针对01的显著增高的抗菌抗体（83%），8例产生针对O139群的显著增高的抗菌抗体（67%）。在接种第2剂双价菌苗5-6周后，加种第3剂双价菌苗，各项抗体检测的结果显示基本没有增强免疫反应。上述结果表明双价菌苗的安全性和免疫原性均较好，该菌苗的有待于在较大规模的人群中应用，进一步观察其安全性和免疫原性。 霍乱口服灭活菌苗的研究已有一百余年，但直到本世纪80年代，随着肠道粘膜免疫机制的阐明，以及灭活菌苗在大量人群中应用得到的经验，该类菌苗的研究才取得了较大的进展。在灭活菌苗中加入CT-B，能刺激产生肠粘膜免疫反应，使疫苗的前6个月的效果增强，保护率达到85%，半年后的3年内保护率为50%。开始加入的是来自霍乱弧菌的提纯CT-B，后加入通过基因工程制备的重组CT-B，以降低成本。口服灭活菌苗安全、可靠，但该类菌苗不能在肠道定居和繁殖，故产生的保护力中等，持续时间较短，故产生的保护力中等，持续时间较短，需多次接种，才能产生较高的免疫效果和保护力，费用较高，对5岁以下儿童效果较差。 （二）基因工程减毒活菌苗 制备O139群工程减毒活菌苗，首先将CT基因簇，包括CT、zot、ace和cep等毒力基因去掉，以减低毒力。将毒力基因插入的靶位点RS1序列和将attRS1序列去掉，以防止菌苗位点特异性重组重新获得CT基因簇。将CT-B基因与一启动子相连并插入菌苗的recA基因使之能高效表达霍乱肠毒素B亚单位，同时也使recA基因突变，使菌苗不能通过同源重组获得毒力基因，最后将一药物抗基因如HgR基因插入hly基因，使菌苗具有一选择标志。根据上述策略研制出的O139减毒活菌苗候选株包括CVK112、Bengal-15和Bengal-2。 |