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1．3 cTnI表达的心肌特异性 人cTnI基因是在心肌特异表达的。Bodor等运用cTnI特异的单抗，对不同来源的人肌肉组织冰冻切片进行免疫组化染色，同时用免疫荧光法测定组织匀浆中的cTnI水平。实验结果表明，正常胎儿和成人的骨骼肌组织，及所有的多肌炎和肥大性进行性肌营养不良（DMD）患者的组织中都没有cTnI心肌表达。Ricchiuti等的研究进一步证实了cTnI心肌的表达的特异性。他们从4例健康人心肌、5例健康人骨骼肌、7例终末期肾病患者骨骼肌和5例DMD病人骨骼肌的标本中提取RNA，分别针对cTnT 、sTnT、 cTnI序列的特异引物，进行逆转录PCR扩增。同时，分别用cTnT 、sTnT、 cTnI的单抗，对蛋白样品进行westerm blot分析。结果发现，在所有的心肌标本中、4例终末期肾病患者骨骼肌中、2例DMD患者骨骼肌中检测到cTnT的PCR扩增产物，蛋白质印迹试验也是阳性。在健康人骨骼肌中均没有发现cTnT mRNA的表达；在所有的心肌标本中，均检测到cTnI特异的mRNA扩增产物；在健康人或病人骨骼肌标本中没能检测出cTnT mRNA的表达。 2 血清cTnI 测定的方法学 cTnI 的测定始于20世纪80年代中期，多采用双抗体竞争放免法和竞争性ELISA测定法。由于实验中所用的抗体都为多克隆抗体，因而交叉反应多，灵敏度差，测定低限只能达到4μg/L。单克隆双抗体夹心放免法和双抗体夹心ELISA法使测定的灵敏度大大提高，测定低限为0.1~0.2μg/L。目前，cTnI的检测多采用化学发光法。其中Hossein-Nia所报道的化学发光免疫测定法，将2株单抗共价偶联于顺磁珠（paramagnetic particles）上作为固相，利用亲和纯化的对cTnI的N末端区特异的多抗，用化学发光物质标记后作为检测抗体，大大提高了测定的精确性和敏感性，此法测定的低限为0.15μg/L。 据报道，对同一病人的血标本，用目前市售的几种不同的化学发光免疫测定试剂盒测定血清中的cTnI水平，各测定结果之间可差10~20倍。这引起了众极大的关注。分析原因，可能由以下几个方面引起：①不同测定方法运用不同校正品；②取样要求的不同，如血清、血浆或全血及使用不同的抗凝剂；③不同抗体识别不同抗菌素原表位的能力不同，或cTnI与TnC 或/和TnT形成复合物时构象的不同；④包含不同表位的cTnI蛋白酶角片段，由于不同的清除率或降解程度的不同，在血清中的半衰期不同；⑤不同的检测系统本身的假阳性；⑥一些突变位点的存在可能影响cTnI某个抗原表位；⑦血循环中cTnI被氧化、还原、磷酸化等。目前较为一致的观点普遍认为，造成各方法测定结果差异的原因是由于使用不同的校正品所致。Shi Qinwei等运用StratusⅡ(Dade International),Opus(Behring Diagnostics)和ACCESS（Beckman Instrument）系统分别测定Stratus质控品、ACCESS质控品和Opus质控品。结果表明，除了Stratus质控品用ACCESS和Opus系统测不出值以外，另外两个质控品用不同系统所测值之间的最大变异不超过5倍。这也表明，不同校正品的使用最多造成了不同系统之间的20%的变异。因此，可能存在有其他影响cTnI的方法都为夹心免疫测定法，因而需要抗体识别的靶表位完全暴露并有正确的构象，且两靶表位之间的区域不被水解。而运用不同抗体进行测定的不同方法，就需要不被水解的cTnI的区域不同。所以cTnI各区域不同的降解情况，也就可能导致了各测定方法之间的变异。Shi Qinwer 等用分别表达有4个cTnI片段的E.coli细菌裂解液，来测试它们与StratusⅡ，Opus和ACCESS免疫试剂盒之间的反应性。并用不表达任何重组蛋白的E.coli细菌裂解液作为阴性对照，用纯化的全长cTnI作为阳性对照。结果表明，Stratus和Opus抗体识别cTnI的N末端部分，而ACCESS的抗体识别cTnI的C末端部分。应用对cTnI的N末端部分和C末端部分特异的单抗，对加有重组cTnI的正常人血清和加有重组cTnI复合物的正常人血清，在37℃分别孵育2、4、6、24和48h后，行westerm blot分析的结果表明，cTnI的C末端部分更易被降解。这也可能是造成这三种测定方法之间变异的主要原因之一。 |