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【关键词】 DD3基因；RT-PCR；前列腺癌；尿液 近年来临床上前列腺癌的患者明显增多，其诊断指标有血清PSA和前列腺穿刺活检，由于临床上影响PSA升高的因素很多，临床假阳性的概率高；其穿刺活检是一种有创性检查，感染和出血的机会大，所以有必要用一种更特异的检测方法来诊断前列腺癌。PCA3是近几年来所发现的一种最佳的前列腺癌特异基因，其表达仅在前列腺上皮细胞，且具有肿瘤特异性。本实验建立在RT-PCR基础上检测尿液中PCA3基因表达情况，以探讨其在前列腺癌诊断中临床意义。
1 资料和方法
1.1 一般资料
本院2008—04～2009—08门诊和住院病人中经穿刺活检和术后病理证实为前列腺癌的病人20例，前列腺增生组中病人30例。
1.2 主要试剂和仪器
Trizol，TaqMan Reverse Transcription Reagents ，Rnase抑制剂，Taq DNA聚合酶，50bp和100bpMarker ，琼脂糖，PCR仪，PCR电泳仪，高速台式冷冻离心机TGL-16M，YLN-2000型凝胶影像分析系统，GIS凝胶图像处理系统，电子恒温水浴锅，FA 2004型电子分析天平，微量移液器，低温冰箱。
1.3 标本的收集和总RNA的提取
（1）取前列腺按摩后的第一次尿液30mL，立即放入冰中冷却。于3000rpm/10min离心收集尿沉渣，加等量冷D-hanks液洗涤两次，放置在-70℃保存备用，按经典总RNA抽屉试剂盒说明书上提取总RNA后真空干燥。用15mL DEPC溶解,取2μL RNA溶液加入98μL水中,混匀后在微量分光光度计上测A260/A280比值及RNA含量。
1.4 RT-PCR检测
（1）cDNA合成：取11μL RNA模板样品，加入oligo180.5μg/μL，具体操作按逆转录试剂盒说明书进行，总反应体积约20μL，最后取2μL来PCR扩增，（2）PCA3的扩增：在外显子1和3之间设计一对PCA3引物，上游引物TGGGAAGGACCTGATGATACA'，下游引物，CCCAGGGATCTCTGTGCTT。
1.5 统计学分析
用SPASS12.0统计软件包对数据进行统计分析。数据分析用t检验。
2 结果
2.1 尿液PCA3基因表达结果
所有标本中均有PSA基因158bp电泳带，前列腺癌患者中见到一特异220bpPCA3电泳带（见图1），其中前列腺增生患者无PCA3基因表达。前列腺癌患者中都表达PCA3mRNA。
2.2 DD3mRNA在前列腺癌的诊断中敏感度较高
见表1。表1 PCA3mRNA阳性率和血清PSA浓度大小的关系（略）
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