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四、温育 温育是ELISA测定中影响测定成败最为关键的一个因素ELISA作为一种固相免疫测定抗原抗体的结合反应在固相上进行要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合必须在一定的温度条件下反应一定的时间温育所需时间与温度成反比即温度越高则所需时间相对较短最为常用的温育温度有37℃和室温其次是43℃和2～8℃ 。 温育这一步是临床ELISA测定中最容易出现问题的步骤通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟～1小时进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1～2小时才能有较完全的结合低于1小时可能会影响测定下限因此关于温育在实际测定操作中一定要注意以下几点： （1）要保证在设定的温度下有足够的反应时间一般来说加完样本和/或反应试剂后将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时孔内温度从室温升至37℃需要一定的时间尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下这段升温时间可能还比较长而在临床实验室中很少有人注意这个问题通常是将微孔板一放入温箱即开始计时这样就很容易造成实际测定中温育时间不够弱阳性样本测不出来的问题曾有一地处南方的血站同行提出了一个问题就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时间在做HBsAg测定的室内质控中测定由卫生部临床检验中心供应的1 ng/ml弱阳性样本时总是测不出来不知原因为何？这可能就与南方冬天室内温度较低有关此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够以致弱阳性样本测定为阴性因此为保证37℃下足够的温育时间临床实验室可自行确定本实验室不同季节（不同室温下）微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃从而适当延长板条在温箱中的放置时间具体的做法是用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可 。 |