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【摘要】目的 对研制的丙型肝炎病毒抗体(双抗原夹心) 酶联免疫检测试剂进行临床评价。方法 以克隆表达的HCV 多表位嵌合蛋白作为包被抗原, 经多表位嵌合蛋白修饰后用于标记抗原, 研制HCV 双抗原夹心酶联免疫检测试剂; 检测血液筛查阴性标本440 份, 乙肝表面抗原阳性标本90 份, H IV 抗体阳性标本10 份, 梅毒螺旋体抗体阳性标本90 份及丙型肝炎病毒抗体阳性标本259 份。结果 对259 份HCV 抗体阳性标本进行检测时, 有3 份标本未检出, 应用Chiron RIBA 确认试剂检测后, 结果为阳性。其余标本的检测结果均为阴性。结论 采用HCV 双抗原夹心酶联免疫检测试剂共检测889 份标本, 其中只有3 份标本结果不一致, 总符合率99. 7% , 敏感性和特异性较好。
【关键词】酶免疫分析 临床评价 丙型肝炎病毒
HCV 感染呈世界性分布, 我国感染者约有4 000 万, 为控制HCV 经血液传播, 要求对献血者进行抗-HCV 的检测。常用的抗-HCV 检测试剂均采用间接酶联免疫法, 该方法中包被抗原的组成和质量是关键因素。目前已开发了第3 代抗-HCV 检测试剂, 包被用抗原多包括HCV-Co re、N S3、N S4和N S5抗原, 大部分为基因工程表达抗原, 特异性和灵敏度达99% [ 1 ] , 但仍不能避免由于抗原的制备及工艺而带来的少数假阳性和极少数的漏检, 尤其是使用间接酶联免疫法本身可引起少数假阳性[ 2 ]。近年来对抗-HCV 间接酶联免疫法试剂单独检测阳性, 且在临界值附近的样本, 用双抗原夹心酶联免疫法试剂检测均为阴性, 且通过进口试剂及RT-PCR 法也证实样本为阴性, 表明抗-HCV 间接酶联免疫法试剂存在一定的假阳性[ 3 ]。为避免临床出现此类现象, 笔者对所研制的双抗原夹心酶联免疫试剂的特异性和灵敏度进行进一步临床评价。
材料与方法
1 抗原的制备 嵌合表位抗原包括HCV-N S3-C-N S4-N S5, 以包涵体形式表达, 通过SP-Sepharo seFF 或Q-Sepharo se FF 离子交换层析进行纯化, 将所收集的洗脱峰再用Sephadex G-50 柱凝胶过滤,SDS-PAGE 鉴定抗原蛋白。
2 双抗原夹心检测抗-HCV 试剂的制备 参见文献[ 4 ]。
3 血清样本 包括血液筛查阴性标本440 份。质控标本449 份(其中乙肝表面抗原阳性标本90 份,H IV 抗体阳性标本10 份, 梅毒螺旋体抗体阳性标本90 份, 丙型肝炎病毒抗体阳性标本259 份)。
4 试剂 吉比爱及Ortho 丙肝病毒抗体酶联免疫诊断试剂检测。Chiron RIBA 确认试剂。
结 果
1 特异性 吉比爱及Ortho 丙肝病毒抗体酶联免疫诊断试剂检测为阴性的440 份标本经研制的双抗原夹心法抗体酶联免疫诊断试剂检测后, 结果均为阴性。对10 份HIV 抗体阳性、90 份HBsAg 阳性和90 份梅毒抗体阳性标本的干扰性实验中, 检测结果均为阴性, 特异性为100. 0%。
2 敏感性 对259 份HCV 抗体阳性标本进行检测, 有3 份标本未检出。3 份样本经Chiron RIBA 确认试剂检测, 结果为阳性。国产吉比爱和Ortho 间接丙肝病毒抗体酶联免疫诊断试剂检测3 份样本均未检出。见表1。
讨 论
应用研制的丙型肝炎病毒双抗原夹心酶联免疫诊断试剂, 检测440 份阴性、90 份乙肝表面抗原阳性、10份H IV 抗体阳性和90份梅毒螺旋体抗体阳性标本的结果均为阴性, 表明该试剂检测丙型肝炎病毒抗体试剂具有很好的特异性。HCV 抗体阳性的259 份标本有3 份未检出, 这3 份样本使用国产吉比爱和Ortho 间接丙肝病毒抗体酶联免疫诊断试剂的检测结果也均为阴性, 经Chiron RIBA 确认试剂检测后, 结果为阳性, 分析其原因可能为酶联试剂所采用的HCV 抗原为嵌合表达的抗原, 而Chiron RIBA 确认试剂是将HCV 抗原分别表达并固定于膜上, 检测针对4 个抗原的HCV 抗体, 结果判断与酶联法不同, 另外酶联试剂与RIBA 确认试剂所用抗原也有一定的差异[ 5 ]。
实验结果表明, 我们所研制的双抗原夹心丙型肝炎病毒抗体酶联免疫诊断试剂对所检测的889份质控标本的检测总符合率达99. 7% , 且敏感性和特异性均较好, 有望用于临床血液标本的筛查。
作者信息：
张贺秋1 王国华1 陈坤1 宋晓国1 冯晓燕1 王袆2 查袆2 邱艳2 李少波3
1.军事医学科学院基础医学研究所，2.北京市红十字血液中心，3.湖南景达基因有限公司
参考文献
1 Colin C, Lanoir D, Touzet S, et al. Sensit ivity and specificity of th ird2generat ion hepat it is C virus antibody detect ion assay: an analysis of the literature[J ]. Journal of Hepat it is, 2001, 8 (1) : 87-95.
2 谢立, 吴晓东. 丙型肝炎病毒检测方法的研究进展及其临床意义[J ]. 世界华人消化杂志, 2005, 13 (7) : 884-886.
3 宋晓国, 凌世淦, 张贺秋, 等. 重组丙型肝炎病毒抗原的研究[J ]. 军事医学科学院院刊, 2001, 25 (2) : 91-95.
4 王国华, 张贺秋, 李少波, 等. 双抗原夹心与间接ELISA法检测抗HCV 对比研究[J ]. 中国医学检验杂志,2005, 6 (4) : 318-319.
5 Engel PM , Dennin RH. Supp lementary ant i-hepat it is C virus (HCV ) test ing w ith 2nd and 3rd generation recombinant immunoblot assay and matrix applied toenzyme immunoassay po sit ive sera and comparison with HCV-RNA detection [ J ]. Zent ralbl Bak teriol,1998, 288 (2) : 267-275.
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