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2+法的20倍)，且需要可加4种试剂的生化分析仪分步加入4种试剂，因而限制了其临床应用，目前仅用于如Hitachi 911型等自动生化分析仪。(2)选择性抑制法：应用两种不同的表面活性剂及多阴离子，根据脂蛋白的酶反应选择性，直接测定HDL-C。第一反应中，加入多阴离子和分散型表面活性剂(亦称反应抑制剂)，LDL、VLDL和CM先在多阴离子下聚集，由于反应抑制剂与LDL、VLDL和CM的疏水性基因具有高度亲和力，故其吸附在聚集的脂蛋白颗粒表面形成遮蔽圈。同时在HDL表面也吸附有少量反应抑制剂，但由于亲和力较弱，其结合是可逆的。第二反应中，与胆固醇酶试剂一起加入具有对HDL颗粒中亲水性基团具有亲和力的可溶性表面活性剂(亦称反应促进剂)，由于反应促进剂对HDL可溶性的强特异性作用可置换其表面吸附的少量反应抑制剂，从而与酶试剂反应，达到无需沉淀分离直接测定HDL-C的目的。1995年日本第一化学药品株式会社(Daiichi)推出第一代可供自动化检测的商品化试剂盒，该试剂盒中的酶试剂是冻干品，复溶后一周即见变色，影响测定效果。1996年下半年推出第二代液体双试剂，试剂稳定，适合于各类自动生化分析仪。美国Genzyme Diagnostics公司的商品化试剂盒N-genousTMHDL-C亦属此类方法。此法所需标本量少(3 μl血清)，精密度高(批内、批间CV均?%)，与PTA-Mg2+法相关性好(r=0.987)，线性范围可达1 500 mg/L，回收率90%～110%。血红蛋白、Vit c对测定无影响，胆红素对测定影响尚存在争议［13，14］。Huang等［14］研究发现选择性抑制法检测HDL-C特异性稍差，可能由于第一步反应中非HDL的不完全包裹遮蔽，而使酶试剂与其中CM、VLDL和LDL中胆固醇发生反应，使结果假性增高。因此，在临床广泛推广应用此法前，必须对校准系统重新标准化以提高其特异性。(3)PEG修饰法：Sugiuchi等［15］于1995年报道应用PEG修饰酶对不同脂蛋白中胆固醇反应的选择性，在α-环糊精硫酸盐和Mg2+及少量DS作用下，不需预先分离沉淀直接测定血清HDL-C的方法。由于PEG6000能引起胆固醇酯酶(CEH)和胆固醇氧化酶(CHOD)的变构，变构酶PEG-CEH和PEG-CHOD对脂蛋白的催化作用有选择性，其顺序依次为LDL＜≈CM＜。而α-环糊精硫酸盐能限制CM、VLDL颗粒进入环状的环糊状结构，从而避免酶的催化作用，这种作用还与Mg2+浓度有关。因此，在Mg2+及少量DS存在前提下，可直接检测HDL-C。日本协和(Kyowa)、德国Centronic gmbH Boehringer Mannheim及英国RANDOX公司等已分别研制出可供自动化检测的商品试剂盒。此法所需血清量少(4 μl)，线性范围宽(达1 500 mg/L)，精密度高(批内、批间CV均?%)，回收率为99%～103%，黄疸、溶血对检测结果影响较小，不受Vit c、肝素等干扰，与PTA-Mg2+法具有良好相关性(r=0.975)。虽然PEG修饰法在高TG(30000 mg/L)时PEG变构酶能与VLDL反应，而使结果轻度偏高，但总误差仍在NCEP可接受范围之内［10］。有作者认为，PEG修饰法在特异性与准确度方面优于选择性抑制法［14］，而更适用于常规实验室。
三、HDL-C检测的标准化
HDL-C是血脂分析的常规项目，已越来越引起临床的重视。研究表明，HDL-C测定误差可引起LDL-C计算误差，其结果小的误差可引起CHD风险估计的严重错误。因此，必须开展检测的标准化工作以保证测定结果的准确可靠性。HDL-C检测的标准化主要在于方法的合理选择、标准品和质控材料的制备及标准化方案的制定与实施等。
1.标准化目标：CDC-NHLBI的标准化程序对HDL-C检测的可接受限的目标进行了规定。要求检测准确度在CDC参考值(RV)的±10%以内，在小于1.03 mmol/L(40 mg/dl)、1.03～1.55 mmol/L(40～60 mg/dl)、大于1.55 mmol/dl(60 mg/dl)浓度范围内，HDL-C检测的最大不精密度s分别为0.065 mmol/L(2.5 mg/dl)、0.078 mmol/L(3.0 mg/dl)、0.090 mmol/L(3.5 mg/dl)。NCEP目前暂定目标为总误差≤22%；精密度要求HDL-C≥1.09 mmol/L(42 mg/dl)时，CV≤6%；HDL-C?.09 mmol/L(42 mg/dl)时，s≤0.065mmol/L(2.5 mg/dl)。准确度要求偏差(bias)≤±10%(与CDC参考方法比较)。1998年后目标为总误差≤13%；精密度要求HDL-C≥1.09 mmol/L(42 mg/dl)时，CV≤4%；HDL-C?.09 mmol/L时，s≤0.044mmol/L(1.7 mg/dl)。准确度要求偏差≤±5%
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