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高密度脂蛋白胆固醇的检测方法及标准化研究进(2)

时间:2010-03-23 20:41来源:收集整理 点击:
2+法沉淀效率高,与CDC参考方法有较好一致性,但精密度较差,美国现已很少采用。Warnick等[6]推荐用DS50-Mg2+法,认为其对分离HDL有较好特异性,但因国内试剂馈缺而限制了其应用。以往报道用DS500-Mg2+法(DS500,分子量为50万)测定HDL-C结果偏低,但将血清与沉淀剂之比改为1∶1后,高脂对VLDL沉淀的干扰大大降低,提高了检测的精密度与准确度[7]。PTA-Mg2+法不干扰酶法测定chol,且试剂易得,对高TG血清也能完全沉淀,是目前临床实验室应用最多的方法,美国有50%以上的商品试剂用此法。Demacker等[8]对常用6种沉淀法进行了比较,结果表明PTA-Mg2+法总误差为10.6%,符合NCEP要求。PTA-Mg2+法结果可靠,费用合理,适合常规应用。中华医学会检验学会也在国内推荐此法,并制定了详细检测草案[9]

  化学沉淀法多受高TG影响,含apoB颗粒因不能完全沉淀而导致HDL-C假性增高。为克服此缺点,美国Reference Diagnostics公司推出新一代磁化DS沉淀法检测试剂盒。其原理是单一沉淀剂与血清标本1∶5混合在一标本杯中,然后将标本杯放进磁盘,非HDL脂蛋白颗粒因被磁化,能很快被磁盘吸至杯底(沉淀),而与HDL颗粒分离(上清)。此过程简单迅速,不需离心,无HDL共沉淀及含apoB颗粒沉淀不完全现象。结果准确,不受高TG干扰,比传统DS50-Mg2+法测定时间大大缩短,亦有一定应用价值[10]

  3.电泳法:在一定电场条件下,由于各种脂蛋白的分子大小及其在缓冲溶液中所带电荷数的不同,故在支持介质上迁移率亦不同。较小的HDL分子向阳极有较高的迁移率,可将HDL与VLDL、LDL区分开。Helena公司已开发可供REP快速全自动电泳仪使用的HDL-C检测试剂盒,其原理是:血清(1 μl)经琼脂糖凝胶电泳(400V,15分钟)后,将chol基质试剂均匀铺在凝胶表面,孵育一段时间(10分钟)后用10%冰醋酸固定,然后将凝胶烤干。570 nm波长下自动扫描即可确定HDL-C百分含量。同时将血清TC值输入,则可求得血清HDL-C值。此法与PTA-Mg2+法有较好相关性,可用于高TG标本检测,也常用于评价各种化学沉淀法沉淀是否完全等,目前多用于临床研究。

  4.直接测定法:由于化学沉淀法测定HDL-C需将标本进行选择性沉淀预处理后,上清液方可用酶法或化学法测定chol。其最大缺点是不能进行自动化分析,尤其不适应大规模流行病学调查或临床大批量标本诸多项目同时检测。国外近几年相继研制开发出几种不需沉淀的直接测定法,可用于仪器自动化测定,为临床及时、快速、准确测定HDL-C及标准化工作提供了条件。(1)PEG/抗体包裹法:Kakuyama等[11]于1994年报道用PEG和抗apoB、抗apoCⅢ抗体包裹非HDL的脂蛋白,然后用酶法直接测定HDL-C的自动化分析方法。日本International Reagents公司已研制成功可供商品化自动检测的试剂盒。测定过程包括4种试剂:①低浓度的PEG4000,包裹CM、VLDL、LDL。②特异性抗apoB、apoCⅢ抗体,使CM、VLDL和LDL复合物凝聚。③酶试剂,用于检测上述复合物以外脂蛋白胆固醇(即HDL-C)。④盐酸胍试剂,终止酶促反应和溶解含apoB脂蛋白复合物,以免其干扰吸光度测定。Nauck等[12]对PEG/抗体包裹法进行了系统评价,认为该法与PTA-Mg2+法具有好的相关性(r=0.970),总CV为2.4%~8.4%,线性范围可达1 500 mg/L,最小可信限~30 mg/L。该法抗TG干扰能力强,TG为20 g/L仅使结果增高2%。溶血使结果显著增高而黄疸使结果偏低。此法不需沉淀分离,易于操作和检测全自动,但由于试剂中需特异性抗体而使成本较高(约为PTA-Mg

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