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为探讨血液病患儿DNA的变异，我们采用流式细胞仪（FCM）检测54例血液病患儿骨髓单个核细胞（MNLL）的DNA含量，以分析其倍体水平及细胞增殖周期，进一步探讨其临床意义。 1、对象与方法 1.1对象 （1）急性白血病组（AL）:初诊为AL42例，其中急性淋巴细胞性白血病（ALL）22例，急性非淋巴细胞性白血病（ANLL）20例。（2）初诊为非白血病的常见血液病组12例:4例急性特发性血小板减少性紫癜（AITP），慢性特发性血小板减少性紫癜（CITP）、再生障碍性贫血（AA）、急性溶血性贫血各2例，营养性缺铁性贫血、粒细胞减少症各1例，均经临床及实验室检查确诊，年龄2～14岁，平均年龄6.5岁。（3）正常对照组15例，为骨髓象正常的儿童，年龄2～14年。平均年龄6.7岁。 1.2方法 （1）样品制备:取肝素抗凝骨髓0.1ml，按常规方法分离MNC，每个测定管加骨髓细胞10 6个，然后依次加入DNA测定液（Coulter DNA Kit），室温保存30min，然后加入PI染色液（终浓度为100μl/ml）。室温下30min后上机测定。（2）DNA测定方法:流式细胞仪FACscan（Coulter公司），15mW氩离子激光光源，发射波长488nm，每个样品测定10000个细胞，采用Coulter公司提供的DNA分析程序，获取 各样本细胞周期时相百分比。流式细胞检测方法:采用Coulter公司生产的流式细胞仪FACscan进行参数检测，每个样本随机测定10 4个细胞，并求出细胞生长分数（%）=（S+G 2 /M）/（G 1 +S+G 2 /M）×100%，将测量的数据、图形同步输入HP-300Consort30计算机，应用相应软件程序进行资料处理。（3）倍体分析:根据DNA指数（DI）判断，本仪器DI正常范围是0.90～1.10，小于0.9为亚二倍体，大于1.10为超二倍体。 1.3统计学处理采用t检验和X 2检验。 2、结果 2.1 DNA异倍体检出率白血病组异倍体检出率57.1%（24/42），其中ALL68.2%（15/22），ANLL为25%（5/20），两者比较存在显著差异（P<0.05），血液病组异倍体检出率33.3%（4/12），与白血病组比较存在显著差异（P<0.05）。正常对照组无1人检出异倍体。
3、讨论 近年来，FCM广泛应用于肿瘤细胞学的临床诊断，人体正常的细胞具有较恒定的DNA二倍体含量，当人体癌变及具有恶性潜能的癌前病变时，在其发生、发展过程中可伴随细胞DNA含量的异常改变［1］ 。本文结果表明，白血病异倍体检出率为57.1%（24/42），血液病患儿异倍体检出率为33.3%（4/12），两组存在显著差异。经追踪，4例异倍体初诊为非白血病中，1例CITP转变为骨髓增生异常综合征（MDS），1例AA发病为ANLL。因此，初诊为血液病的患儿，临床进行骨髓细胞形态学检查的同时，应用FCM检测其骨髓MNC的DNA含量，对DNA含量异常的非白血病患儿，应高度注意其癌变的可能。 本资料显示，白血病异倍体检出率显著高于非白血病组，因此DNA倍体改变在AL中极其常见，而且ALL的DNA异倍体检出率明显高于ANLL组，从遗传学角度分析AL的发病机制表明ANLL患儿的染色体异常较多地表现为结构异常，而不是数目的异常，还可能是临床上ANLL较ALL缓解率低的原因之一。此外，本文接受治疗的8例ALL中6例达到完全缓解（CR），其中4例为超二倍体，另2例分别为二倍体和亚二倍体，提示超二倍体患儿的CR率高，预后较好，与多数文献报道一致 ［2，3］ 。 |