4.协同凝集试验(co-agglutination) 以金黄色葡萄球菌为载体,利用其细胞壁中的A蛋白(SPA)具有结合人及多种哺乳动物IgG Fc段的特性。将特异性抗体结合至金黄色葡萄球菌菌体,其Fab段暴露于菌体表面,遇到相应抗原时与之结合,即可导致金黄色葡萄球菌凝集(图18.2)。称为协同凝集试验。常用于早期诊断流脑、伤寒、菌痢及布鲁氏菌病。 5.抗人球蛋白试验(anti-human globulin reaction) 机体受抗原刺激后,除可产生完全抗体外,在某些病人(先天性溶血性贫血)也可产生不完全抗体(IgG),后者虽能与抗原结合,但不出现肉眼可见反应现象。Coomb等把含有不完全抗体血清球蛋白注射到异种动物体内,使其产生抗人球蛋白抗体,将该抗人球蛋白抗体加入到颗粒性抗原与相应的不完全抗体复合物中,就能出现肉眼可见的凝集现象,称为抗人球蛋白试验,又称Coomb's试验。主要用于检测Rh抗体及布鲁氏菌抗体。 图18.2 凝集试验示意图 (二)沉淀反应(precipitation) 可溶性抗原与相应抗体在有适量电解质存在下,出现肉眼可见的沉淀现象,称为沉淀反应。参与反应的抗原称沉淀原(precipitinogen),抗体称沉淀素(precipitin)。沉淀原可以是多糖、蛋白质、类脂等,由于其体积小,相对反应面积大,故试验时需对抗原进行稀释,以避免后带现象。应用较早的沉淀反应是环状沉淀反应(ring precipitaion)和絮状沉淀反应(flocculation precipitation),因其敏感性不高,已被淘汰。目前应用最多的沉淀反应是Oudin建立的凝胶(琼脂)沉淀反应及其派生方法。 1.单向琼脂扩散(simple agar diffusion) 简称单扩,将特异性抗体与熔化的琼脂混合均匀,使抗体均匀分布于琼脂,然后浇制成琼脂板,再按一定要求打孔并加入抗原,使抗原向孔周自由扩散,与板中的抗体形成沉淀圈。本法为定量试验,沉淀圈的直径与抗原浓度成正比。单扩常用于血清中免疫球蛋白、AFP等的定量测定。 2.火箭电泳(rocket electrophoresis) 若在单向琼脂扩散基础上,加入抗原后,将琼脂板置电场中,使抗原置于负极即向正极定向扩散,在与板中的抗体结合而形成锥形沉淀峰,形似火箭,故名火箭电泳。沉淀峰的高度与抗原浓度成正比。由于在电场作用下,促使带负电荷多的抗原泳动,故火箭电泳需时短,可用于快速测定抗原含量,如在标本中加入少量同位素标记的抗原后,可作放射免疫自显影,能检出微量抗原。应用范围与单扩相似。 3.双向琼脂扩散(double agar diffusion) 简称双扩,先制备琼脂板,再按要求打孔并分别加入抗原和抗体,使两者同时在琼脂板上扩散,若两者对应且比例合适,则在抗原和抗体两孔之间形成白色沉淀线。一对相应的抗原抗体只形成一条沉淀线,因此可根据沉淀线的数目推断待测抗原液中有多少种抗原成分;根据沉淀线的吻合、相切或交叉形状,可鉴定两种抗原是完全相同、部分相同还是完全不同(图18.4)。本法常用于定性测定抗原抗体,亦可用于判断免疫血清的效价。
|