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样品离心方式对HBsAg ELISA试验结果的影响

时间:2013-09-28 20:15来源:幸福检验网 收集整理 点击:
       笔者在使用某一HBsAg ELISA试剂检测血液的过程中,有时发现空白和阴、阳性对照以及室内质控检测孔正常,而血液标本(不抗凝)检测孔的S/CO值却比较高的情况(82.4%的值>0.571):标本的阳性率较高(17.05%)且80%的阳性标本都表现为弱阳性结果(S/CO值为1.000~4.762),即所谓ELISA试验的“花板”问题。经过仔细分析并采取相应措施。笔者解决了这一问题,现将做法总结如下。
 
1 材料与方法
       1.1 标本  无偿献血者不抗凝血液标本,共1056份,根据离心程序的不同分为3组,每组(各程序)352份。
 
       1.2 试剂与仪器  ELISA HBsAg试剂(某公司生产,批号20030317),经中国药品生物制品检定所检定合格并贴有防伪标签,运输和储存方式正确,在有效期之内;日本久保田(KUBOTA)8410离心机,瑞士哈美顿(HAMILTON)公司AT plus 2全自动加样器和FAME全自动酶免分析仪,仪器状态良好。
 
       1.3 方法  所有经HBsAg金标试剂检测合格的献血者在献血后留取其不抗凝的血液标本,标本不密封,留取后在常温下1h内离心。离心之后的血清标本在全自动加样器和全自动酶免分析仪中,按HBsAg试剂说明书的要求,作HBsAg EUSA法的自动检测。按3种程序离心:程序1:1500r/min,5min;程序2:2000r/min,10min;程序3:3000r/min,15min;每个离心程序处理标本352份。
2 结果(表1)
样品离心方式对HBsAg ELISA试验结果的影响
3 讨论
       本实验严密设计,排除了实验仪器和试剂以及操作步骤对实验结果的影响。实验的空白和对照以及质控孔都正常,只有血液标本检测孔的情况异常,因此原因只能在标本方面[1]。由于献血者需在HBsAg金标试剂检测合格以后,才能献血并留取血液标本,在HBsAg的ELISA检测中,血液标本的阳性率不应该很高。但因标本不抗凝,在留取之后的1h之内离心,故不抗凝血液标本的离心处理就成为影响实验结果的主要可疑因素;而不抗凝血液标本的离心处理确实是影响ELISA HBsAg试验结果的主要因素,当不抗凝血液标本被充分离心分离后,就可得到理想的实验结果(表1)。
 
       为了避免ELISA试验“花板”,降低检测的假阳性率,获得理想的试验结果,可以采取下列措施:①使用抗凝血标本,便于标本的离心分离。② 不抗凝血液标本过夜之后才检测,让血凝块更好地收缩,让标本中的非特异性物质被充分地包裹,降低非特异性反应所致的假阳性率[2]。③ 标本离心时,加大离心转速,延长离心时间,使红细胞和纤维蛋白充分沉降,使标本的离心分离更加彻底[3]。可参照“血清样品采集和处理:用一次性注射器(或真空采血管)抽取一定量静脉血,室温下自然放置1~2h,待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min离心15min,吸出血清备用”[4]。④标本加样时避免加入红细胞和/或纤维蛋白,避免这两种干扰物质对实验结果的影响。
 
参考文献
1 徐峰,范红松.肝素抗凝血浆对HBsAg定性检测的影响.四川省卫生管理干部学院学报,2004,23(3):171
2 王蕾,许静,高锋.测定乙型肝炎病毒表面抗原S/CO值的临床应用评价.上海医学检验杂志,2003,18(5):288
3 祝卫平,肖爱民,郭红,等.离心加速ELISA 反应的研究.上海医学检验杂志,1994,9(3):218
4 中国疾病预防控制中心. 全国艾滋病检测技术规范(2004年版).2004-8-1
 
作者信息:成都市血液中心    李 文 王丽红
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