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系统性风湿病的临床免疫学试验进展(2)

时间:2010-03-16 14:55来源:本站收集 点击:

    根据各抗原特性,采用不同的试验方法检测相应的抗体。①抗ds-DNA抗体的检测:经典的试验方法间接免疫荧光法,用马疫锥虫或短膜虫作为反应底物,虽其特异性较高,但敏感性较低;放射免疫法(结合率≥20%为阳性)和金标抗体测定法其实验结果相对较低。②抗组蛋白(H)抗体的测定曾用肾脏组织细胞作为反应底物应用免疫荧光法,有于此抗原的稳定性较差,其实验的敏感性较低,故现采用ELISA较多。③抗非组蛋白(ENA)抗体的测定以往常以粗提的多组份ENA抗原为反应底物,用对流免疫电泳法测定,也称第二筛选实验。然后琼脂免疫双扩散方法,以粗提的单组份抗原为底物分别对相应的抗体测定。近年来,免疫印迹(Western Blotting)技术应用于临床,给临床检测抗体带来了许多方便,但两种方法测定抗体的阳性率基本相同,只是免疫印迹技术更简便、更科学化。由于目前所应用的反应板是硝酸纤维膜,反应底物为提纯的多组份ENA多肽,某些试剂的稳定性尚存在一定问题,故通常琼脂免疫双扩散和免疫印迹两种方法同时做以相互弥补其实验缺陷,提高其敏感性和特异性。④抗核仁抗体的测定通常应用间接免疫荧光法。抗脱氧核糖核蛋白(DNP)抗体,与狼疮细胞有同等的临床意义,通常应用乳胶颗粒凝集法测定,近年来应用ELISA方法测定,具有实验简便、敏捷和敏感性高的优点。
    (二)类风湿因子(rheumatoid arthritis factor,RF) 自Waaler和Rose报告RF以来,对RA的诊断与治疗起到了重要作用。RF是一种直接抗IgG的Fc部分的抗体,故又称自身抗抗体,是免疫复合物的一部分,与RA血管炎的发生有关,是冷球蛋白的主要成份,其中IgM-RF和IgG-RF已用于临床测定。几乎所有正常人均存在RF基因编码,但很少出现RF阳性,仅占总人群的2%~3%,且大多为老年人和有慢性炎症的病人。在老年人中有2%~5%阳性,这种阳性主要为IgM-RF阳性,滴度较低。通常临床所测的RF为IgM-RF。IgM-RF是巨球蛋白,与绵羊红细胞可发生凝集反应,但测定方法不便。目前通常用致敏乳胶颗粒和ELISA法测定IgM-RF,具有同样的价值(见表-3)

表-3 RF的临床意义

 
RA(%)
SLE(%)
AS(%)
PSS(%)
ISS(%)
MCTD(%)
RF
70~80
40~60
极少
30~40
50~60
60~70

    注:RA.类风湿关节炎;SLE.系统性红斑狼疮;AS.强直性脊柱炎;PSS.系统性硬化症;ISS.原发性干燥综合征;MCTD.混合结缔组织病。
    IgM-RF测定滴度为:1∶16可疑,≥1∶32阳性。RA中可有很高的滴度。IgG-RF在血清中出现较晚,但更有意义。特别在RA活动期IgM-RF阴性时,而IgG-RF可阳性,对活动期RA的阳性率可达90%以上。目前常用的测定方法为ELISA,方法敏捷,能够定量检测,更有利于临床诊断和评价病情。对于血清和滑液中RF测定的临床意义无差异性,而血清测定更直接、方便,不必滑液测定。
    (三)红斑狼疮细胞(lupus erythmatosus cell, LEC) LEC是最早能鉴别SLE作为自身免疫病的抗核试验,但缺乏敏感性和特异性。在RA等患者血清中亦可测得LEC,而在SLE患者血液中可能由于药物等因素的影响其阳性率很低。因此,目前有条件的医院已基本不用此项检查,由抗DNP抗体取代,且具有同等的临床意义,在活动期SLE中阳性率为40%左右。
    (四)抗中性粒细胞浆抗体(ANCA)和抗血管内皮细胞抗体(AECA)  ANCA在血管炎疾病的诊断中有重要的临床意义,目前检测ANCA多用间接免疫荧光法,也用ELISA法针对靶物质测定。依照荧光法测定显示的核型分为胞浆型、核周型和不典型核周型3型(表-4)。胞浆型ANCA(cANCA)是一种抗蛋白激酶-3(PR3)的抗体;而核周型ANCA(pANCA)是一种抗髓过氧化物酶(MPO)的抗体。pANCA在许多炎症性疾病中,特别是在Goodpasture综合征、结节性多发性动脉炎等血管炎类疾病中呈阳性。cANCA在韦格内肉芽肿疾病中的阳性率为30%~90%,有特异性。用ELISA法可直接测定抗蛋白激酶-3(PR3)的抗体和抗髓过氧化物酶(MPO)的IgG和IgM两种抗体,同时具有更高的敏感性。

表-4 ANCA的临床意义

疾 病
cANCA
PANCA
不典型pANCA
韦格内肉芽肿
+
-
-
显微镜下多动脉炎
+
+
-
变应性肉芽肿
+
+
-
结节性多动脉炎
-
+
-
原发性新月型肾小球肾炎
-
+
-
系统性红斑狼疮
-
+
+
类风湿关节炎
-
+
+
溃疡性结肠炎
-
-
+
克隆病
-
-
+
原发性硬化性胆管炎
-
-
+
自身免疫性肝炎
-
+
-
原发性胆汁性肝硬化
-
-
+

    AECA目前应用免疫荧光法测定,其表现形式和临床意义与ANCA有近似之处,但对一静脉炎为病理基础的血管炎疾病更有意义。
    (五)近年来相继开展了类风湿关节炎早期诊断的抗体检查,如①抗核周因子(antiperipheral factor, APF),用间接免疫荧光法,底物为上皮细胞;②抗角蛋白抗体(AKA),用直接免疫荧光法,底物为小鼠食道;③抗Sa抗体和抗RA33抗体,常用Western Blotting法测定。此4种抗体在类风湿关节炎中的阳性率约为40%~75%,敏感性和特异性均在90%以上。
    (六)人类白细胞相容性抗原(HLA) Ⅰ类抗原中,90%的强直性脊柱炎患者和50%~70%的瑞特综合征患者HLA-B27阳性,目前采用细胞毒实验和流式细胞仪两种方法测定,其临床意义相同,但两种实验方法的临床实用性有待进一步验证。Ⅱ类抗原中,HLA-DR2在系统性红斑狼疮患者中表达增强,HLA-DR3在系统性斑狼疮和干燥综合征患者中表达增强;HLA-DR4/DW4与类风湿关节炎的发生有明显关系。
    (七)抗磷脂抗体(antibodiese to cardiolipin antigen, ACLA) ACLA中的抗心磷脂抗体和抗狼疮凝集物对系统性风湿病的病情评价具有重要意义。ACLA可为原发,即抗磷脂抗体综合征;也可继发于各种血管炎疾病。抗心磷脂抗体通常采用ELISA法测定其IgG、IgA、IgM三种抗体,阳性提示有发生习惯性流产、微血栓形成和血小板减少的可能。狼疮抗凝物阳性预示有血栓形成的可能,通常发生在红斑狼疮和以血管炎为病理基础的病人。

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