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不完全抗体效价快速检测法

时间:2010-03-16 14:55来源: 点击:

孕妇血浆内的高效价IgG抗体可通过胎盘屏障进入胎儿体内,与胎儿红细胞上对应的血型抗原结合,抗原抗体反应导致胎儿红细胞溶血,出生后临床表现为新生儿病理性黄疸。现在证明母体高效价IgG抗体是新生儿溶血病的主要病因,孕妇不完全抗体效价检测已成为围产检查的常规项目。传统的抗人球法时间长,步骤繁琐,不少实验室开展有困难,有报道凝聚胺试剂盒可用于效价测定 [1] ,我们对这两种方法进行了比较。

 

1 材料

 

1.1 凝聚胺(polybrene)试剂盒 台湾BASO公司产品,包括低离子介质,凝聚胺,重悬液。

 

1.2 抗人球蛋白血清 上海血液中心血型参比实验室提供。

 

1.3 0.1%2-巯基乙醇(2-Me) 自配。

 

1.4 3%标准A、B型红细胞自配。

 

1.5 质控抗D血清 美国Biotest公司产品。

 

1.6 检测对象 50例医院送检的O型孕妇血清标本。

 

2 方法

 

2.1 IgG抗体的制备 标本血清和2-Me按1:2加入玻璃试管中,封口置37℃水浴10min。另外标记四排试管,分别 检测IgG抗A、IgG抗B抗体,每管加入生理盐水2滴,采用倍比稀释法将水浴后已破坏IgM抗体的待检血清分别加入两排试管中,此时稀释度分别是1:4,1:8,余此类推。

 

2.2 抗人球法 两排试管中分别加入标准A、B细胞各1滴,37℃水浴1小时,生理盐水洗涤3次,加入2滴抗人球试剂,离心看结果。

 

2.3 凝聚胺法 两排试管中分别加入标准A、B细胞各1滴,加入0.6ml低离子介质,2滴聚凝胺,37℃混合均匀1min,离心15s,倒去上清,加入2滴重悬液,观察结果。

 

2.4 结果判断 以产生1+反应的血清最高稀释度来确立效价,凝聚胺法减去前两支管4+凝集的评分(2×12分)进行修正,通过凝集强度评分标准对试验结果进行统计学分析,评价两种方法的差异 [2]

 

2.5 质控 两种方法需同时做质控,阳性对照管加入2滴IgG抗D血清,阴性对照管加入2滴AB型血清或生理盐水,阴、阳性管各加入1滴3%O型Rh(D)阳性细胞,两种反应介质的加入同2.2、2.3。

 

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