临床酶测定标准化的几个问题(2)
时间:2010-03-23 20:40来源:收集整理 点击:次
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1共16项试剂质量检定标准。关于准确性的检定标准，后5项“暂缺”，而前11个酶的不准确性都定为≤10%，检定方法都“暂定与定值血清靶值”比较。其中，GGT试剂盒接受检定的必须采用γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺(Glucana)为底物，这就可以使γ-谷氨酰-对-硝基苯胺为底物的试剂盒被淘汰。这与IFCC和我国的GGT推荐法相一致。现在已知后者因溶解度限制，使用浓度只能达到4 mmol/L，相当于其Km(0.98 mmol/L)的4.1倍，测定准确性低(?%)，而推荐方法中Glucana溶解度好，采用6 mmol/L浓度，相当于Km(0.65 mmol/L)的9.23倍，使测定准确性达95%以上。另如，ALP试剂盒接受检定的产品必须使用2-氨基-2-甲基-1-丙醇(2A2M1P)为缓冲剂，而不接受以二乙醇胺(DEA)或碳酸盐为缓冲剂的产品，这也将有利于提高ALP测定结果的室间可比性，提高测定的准确性［１］。这与IFCC的推荐方法一致，但与1989年日本JSCC和我国1996年提出的推荐方法不同，后二者采用的缓冲液是2-乙基氨基乙醇(EAE)。EAE优于2A2M1P已有论述［１５］。在LDH一项中，检定标准规定的反应方向与推荐法一样是L→P，这就可以避免L→P和P→L二种试剂盒并存造成的LDH测定结果的混乱。当然，需讨论的问题还有很多，在此不一一赘述。总之，“与定值血清靶值”比较将显示出试剂盒质量的优劣。但问题是：(1)“定值血清”是什么血清?是人的混合血清还是动物血清或是蛋白含量和离子成份与人血清相似的“人造血清”?(2)向血清中加入的酶是人血清或组织来源的酶，还是动物组织来源的酶，还是基因工程细胞的酶?(3)给血清中各种酶定值采用什么方法?由什么实验室参与定值?“靶值”如何确定等等。对这些问题必须有科学明确的答案，才能使准确性的检定科学有效。
iFCC已于1989年提出了一个关于《酶测定参考物》的文件(草案)，按要求应当由参考实验室采用参考方法给酶定值。现已有欧洲(CBR)和美国(NBS)的酶校正物，它们都是在严格指定的测定程序中，提供一个有确切催化浓度的测定靶值。CBR的酶参考物定值项目包括ALP、GGT、ALT、CK；NBS的SRM-909定值项目包括ACP、ALP、ALT、AST、CK、LDH、GGT。多项研究使用这些酶校正物成功地以IFCC推荐方法校正了各自地区性的推荐方法，用严谨科学的实验研究证明了二种方法间的可移值性。同样，在确定常规方法与推荐法间是否有可移值性的过程，需要理论和实验研究的结合；待接受酶参考物校正的常规方法或待检定质量的商品试剂盒，在分析原理上要与定值用的参考方法相同；第二要用实验证明二种方法对酶校正物和一定数目的病人标本的分析应答相同。其中包括对目标酶有同样或非常接近的特异性；对存在的同工酶或同工酶亚型有相似的选择性；对内源性酶促或非酶促“旁路反应”(“Side reaction”)有相似的不敏感性。应指出，参考方法的性能特点，如精密度和无偏差等，并不会因为其定值的校正物使用而转移到常规方法身上，校正后的结果质量反映的仍是常规方法自身的性能特点。具有可移植性的二个方法间应有一个恒定的数学相关，并应依此将被校正的方法参考值做相应的转换。多年来，国内外的实验研究都证明，必须非常恰当、严格的选择校正物和测定方法，才能科学有效地用一种方法去校正另一种方法。否则，即使有了一种用参考方法定值、性能稳定的酶校正物，而不问青红皂白，不做深入细致的实验或调查，一律要求在常规实验室中，将各种常规方法的测定结果硬性“拉到”校正物定值上，把酶校正物简单地当作一般代谢物的已知纯度的标准物那样使用，这不仅不会提高酶实验质量，无助于酶测定的标准化，相反会造成测定结果和临床应用的混乱
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