输注病毒灭活血浆成为目前国内外预防输注血浆制品传播传染病的有效措施。亚甲蓝光化学法灭活病毒是最近几年才发展起来的新技术,该法灭活血浆中病毒的效果已被证实,我国部分地区血站已广泛推广应用。亚甲蓝是一种染料,属于吩噻嗪类药物,是临床上常用的解毒剂,主要用于治疗亚硝酸盐和氰化物中毒。它能与病原微生物核酸和蛋白质结合,在适当波长的荧光照射下,发生一系列光化学或光生物效应导致病原体失活。灭活病毒的效果与亚甲蓝浓度,光照温度、时间、强度,血袋容量等因素有关。本血站自2009年6月末起,采用该法对血浆进行病毒灭活,为了解病毒灭活后血浆中凝血因子Ⅷ的变化,以及该法影响凝血因子Ⅷ含量改变的因素,对病毒灭活前后的凝血因子Ⅷ的含量进行检测。 1 材料与方法
1.1 研究对象 随机抽取唐山市中心血站2009年10至11月无偿献血全血标本60份(400 ml/份),均于采血后6 h内滤除白细胞,离心,制备成新鲜液体血浆(200 ml/份)。将血浆无菌留样2 ml(Ⅰ组),检测其中的Ⅷ因子含量。另外无菌留取2 ml血浆(Ⅱ组)不加亚甲蓝,剩余的血浆加入亚甲蓝,将它们均放入病毒灭活箱中灭活。
1.2 试剂与仪器 一次性使用去白细胞塑料血袋(山东威高集团医用高分子制品股份有限公司,批号:0908153,有效期:2011.07);一次性使用病毒灭活装置配套用输血过滤器(淄博中保康医疗器具有限公司,批号:20090626,有效期:2011.05);J6MZ大容量低温离心机(美国Beckman公司);HDME1A型医用病毒灭活箱(上海输血技术有限公司);低温血液滤器工作柜(天津市正源制冷设备有限公司LBC222);SE250型高频热合机(深圳达科为医疗器械有限公司);CompoDock型无菌导管连接器(德国);STatr4半自动血凝仪(法国Stago公司);乏Ⅷ因子血浆(批号:S302002,有效期:2012.02)、APTT试剂(批号:TE090722,有效期:2012.12)、CaCl2试剂(批号:00806031,有效期:2012.12)、IBS稀释液(批号:S0903005,有效期:2012.12)均由德国Marbury公司生产。
1.3 新鲜血浆的病毒灭活处理 将血浆通过无菌导管连接器与一次性使用病毒灭活装置配套用输血过滤器连接,向血浆中加入亚甲蓝,混匀后使其终浓度为1 μmol/L左右,将加入亚甲蓝的血浆平放入病毒灭活箱中的搁架上进行照射,搁架的摆动频率为60次/min,光照强度为30 000~38 000 lux,温度为2~8℃,照射时间为35 min。在低温血液滤器工作柜内,温度为2~8℃,将光照后的血浆通过病毒灭活过滤器滤除亚甲蓝,混匀后无菌留样2 ml(Ⅲ组)。检测Ⅱ、Ⅲ组血浆中的Ⅷ因子含量。
1.4 检测方法 Ⅷ因子含量的检测采用STatr4半自动血凝仪,严格按照凝血因子Ⅷ检测试剂的说明书方法操作。
1.5 统计学分析 计量资料以±s表示,采用配对t检验,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组血浆Ⅷ因子水平分别为(0.86±0.02)、(0.81±0.02)、(0.78±0.02) U/ml,3组血浆Ⅷ因子水平间差异无统计学意义(P<0.05)。
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