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试验原理

        HLA-B27属于1型MHC基因。基本上表达在机体所有有核细胞上，特别是淋巴细胞表面有丰富的含量。使用荧光定量标准微球，校正HLA-B27实验条件后，测定样本中T淋巴细胞HLA-B27表达水平。若HLA-B27表达水平大于标准微球设定MARK，则为阳性结果；若HLA-B27表达水平低于标准微球设定MARK，则为阴性结果。

实验试剂

Anti-HLA-B27 Kit(美国BD Biosciences公司；CAT:340183)，
1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE
2、HLA-B27 Calibration beads
3、FACS Lysing Solution

实验步骤

1、标本采集：使用EDTA-K2抗凝真空采血管，抽取静脉血2ml。
2、染色和固定细胞：
（1） 标本管编号A，取一只流式专用管A1。
（2） A1管加入Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE 30ul。
（3） A1管中再加入全血50Ul，混均。
（4） 置室温，避光孵育15min。
（5） 加入FACSLysing溶血液2.0ml，置室温，避光孵育10min。
（6） 300g离心5min，弃上清液。
（7） PBS洗涤细胞两次，300g离心5min，弃上清液。
（8） 1%多聚甲醛0.5mL。
3、上机检测；分析结果；打印实验报告。

临床意义

         HLA-B27抗原表达与强直性脊椎炎发病具有高度的疾病相关性。在强直性脊椎炎患者中，95%以上个体是HLA-B27抗原阳性；而在健康人群中HLA-B27抗原表达阳性者不足7%。HLA-B27阳性个体的该病相对危险率达300%以上。现今发现与HLA-B27高度相关的疾病主要有：强直性脊椎炎、莱特病（包括腹泻、多发性关节炎、尿道炎的综合症）和急性葡膜炎。最近研究还认为与心肌炎等心脏病有关。

质量控制

1、 先用HLA-B27标准微球校准仪器，设定正确的“MARK”。
2、 收集T细胞太少（少于500个）、碎片污染太多（超过10%）、门中T淋巴细胞不纯（小于90%）可能引起实验结果不正确。
3、 整个实验过程中注意避光、避免抗体、血液粘附于试管壁，否则细胞不能被染色或染色不充分，而影响检验结果。
4、 溶血时间不宜过长，否则会引进白细胞破碎