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耐甲氧西林葡萄球菌检测

时间:2010-03-22 19:23来源:收集整理 点击:

耐甲氧西林葡萄球菌(methecillin resistance staphylococcus,MRS)
一:1ug苯唑西林纸片的抑菌圈直径《10mm,或其MIC≥4 ug/ml的金黄色葡萄球菌、对1ug苯唑西林纸片的抑菌圈直径《17mm,或其MIC≥0.5ug/ml的凝固酶阴性葡萄球菌称耐甲氧西林葡萄球菌(methecillin resistance staphylococcus,MRS)。
二:细菌的耐药机制
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)对所有的β-内酰胺类药物,包括含酶抑制剂和碳青霉烯类药物耐药,并常对氟喹诺酮类、氨基糖苷类、大环内酯类、林可霉素和四环素耐药。其耐药机制主要是因为MRSA多了1个青霉素结合蛋白PBP2α。MRSA所特有的PBP2α不但与β-内酰胺类抗生素的亲和力极低,而且具有其他高亲合力青霉素结合蛋白(PBPs)的功能。当其他PBPs被β-内酰胺类抗生素抑制而不能发挥作用时,PBP2α可替代它们完成细菌细胞壁的合成,从而使细菌得以生存
从基因水平看,PBP2α是染色体上的mecA基因,它决定MRSA对β-内酰胺类抗生素的耐药性,且可被β-内酰胺酶调节基因系统调节,但其耐药水平的高低则受染色体上的辅助基因调控。
耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS),包括耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE),与MRSA的耐药性及耐药机制相似。在MRCNS中,MRSE耐药菌居首位,其次为耳葡萄球菌和溶血葡萄球菌。许多药敏试验及临床试验证明,上述耐药菌对万古霉素、去甲万古霉素、替考拉宁均敏感。此外,体外药敏试验虽然显示利福平也具有良好的抑菌率,但临床疗效不甚满意。
对糖肽类敏感的金黄色葡萄球菌转变为不敏感的机制:由于糖肽类抗生素的广泛使用, 1997年日本在世界上首次报道发现了在上述耐药的金黄色葡萄球菌中,对万古霉素敏感性降低的金黄色葡萄球菌。为了在耐药金黄色葡萄球菌感染时,准确而有效地应用万古霉素,我们首先就应了解金黄色葡萄球菌对糖肽类药物敏感性降低的机制,以防止因为错误地滥用万古霉素而出现完全耐万古霉素的金黄色葡萄球菌(GRSA)。国外有专家经过实验研究认为:出现GRSA是由于,原本对糖肽类抗生素敏感的金黄色葡萄球菌(GISA)细胞壁结构改变,细胞壁中的未酰化氨基酸增加,使其结合万古霉素能力增加,阻碍了万古霉素进入胞质活性部位,从而逃避了万古霉素的作用,细菌因此而仍就能够缓慢生长。这些GISA就转变为GRSA,专家因此而提出了“药物捕获”的耐药机制。国外还有专家,在实验室用万古霉素平板筛选对万古霉素耐药性越来越高的菌落时发现,GRSA菌株的PBP2α量明显比MRSA增多。他们由此推测,GISA菌株上增加的PBP2α能与万古霉素竞争结合肽聚糖前体的靶位,从而抑制万古霉素活性。
三、检测
1.常规方法
(1)纸片扩散(K-B)法
   由于苯唑西林较甲氧西林稳定,不易失活,通常使用苯唑西林代替甲氧西林测定葡萄球菌。M-H琼脂平板,直接菌落悬液法,苯唑西林纸片含量为1ug/片,35℃24小时孵育,金黄色葡萄球菌抑菌圈直径《10mm;凝固酶阴性葡萄球菌抑菌圈直径《17mm。
(2)肉汤稀释法
金黄色葡萄球菌:苯唑西林MIC≥4 ug/ml;凝固酶阴性葡萄球菌:苯唑西林MIC≥0.5ug/ml。
(3)琼脂稀释法
该法被推荐为测定耐甲氧西林葡萄球菌的参考方法,NCCLS推荐M-H琼脂中含苯唑青霉素6ug/ml,并加有NaCL(4%,w/v)对琼脂可进行点接种或用棉拭子蘸取相当于0.5麦氏比浊管的直接菌落悬液进行划线接种。35℃24小时孵育检查琼脂表面有无细菌生长,任何生长表示苯唑青霉素耐药,对于凝固酶阴性葡萄球菌检出耐甲氧西林菌株,需将培养皿孵育48小时。

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