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该技术除最初用于检测分泌抗体的B细胞外，更多的则是用于检测T细胞各类CK的分泌状况，因此，ELIspot已成为当今免疫学研究中T细胞功能测定的标准技术。其优点在于提供了一个接近于体内的实验环境，在几乎自然生理条件下，观察单个细胞分泌免疫活性物质的进程。能检出频率为百万分之一的阳性细胞，这种分辨率已经远远超过胞内细胞因子的四聚体染色和ELISA法测定的灵敏度[7]。由于该技术易受多种测定因素的干扰，因此对实验操作要求较高，包括抗体包被、洗涤、激活物（如特异性抗原肽）的加入、细胞接种及培养均需严格无菌；在细胞培养过程中应避免移动、碰撞，尽量减少开关培养箱的次数，否则会导致细胞移位，造成斑点模糊和拖尾现象的发生。同时应多设重复孔，并设置阳性、阴性和空白对照。为实现不同实验者或实验室检测结果的可比性，还需有一种定量的质控系统。目前，国际上多采用核心参比实验室的质控方法，即以核心参比实验室的质控细胞为质控品，对本实验室的结果进行质量控制。 3．以新型标记物为基础的免疫测定技术 3．1 元素标记免疫测定技术 主要有以镧系元素(如Eu3+,Tb3+或Sm3+等)作为标记物的时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)和钌元素(Ru)作为标记物的电化学发光免疫分析(ECLIA)。TrFIA除有测定范围宽，试剂稳定，测定速度快，灵敏度和特异性高外，还可通过双标记进行两种指标的同时测定[8]。由Roche-Boehringer Mannheim开发的ECLIA技术，其特点是元素钌可以在电场作用下反复被激发而使信号得以放大，测定灵敏度较通常的化学发光免疫分析（ECLIA）要高得多[9]，这些元素标记免疫测定均需特定的仪器设备并用配套试剂。 3．2 核酸标记免疫测定技术 该技术是以核酸的扩增或转录翻译为基础的。DNA与上述标记物不同，其本身并无指示特性，但通过聚合酶链反应(PCR)，可在数小时内扩增数百万倍，因而具有极高的检测灵敏度[10]。而转录翻译则是将编码酶（如荧火虫荧光酶和β-半乳糖苷酶α肽）的DNA片段标记抗体，抗原抗体固相反应后再对DNA进行细胞外转录翻译成相应的酶进行测定[1]。由于1个DNA分子经转录可得到多个mRNA分子，同时1个RNA分子经翻译又可生成数个蛋白质分子，因此也具有很高的测定敏感性。但这类技术目前尚处于探索和研究阶段，也无现成的商品试剂盒供应。 |