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到目前为止，为了研究 HBx的功能以及HBx致HCC的机理，已建立了多种 HBV X基因表达体系，但因受实验条件、细胞类型、培养环境以及HBV感染的阶段等因素的影响而导致HBx表达的差异，进而影响实验的结果，这也可能是目前研究结果存在争议的原因之一。因此，在一种细胞模型或动物模型实验研究中得出的结果并不一定能反映在人体的实际情况，必须用多种模型去验证及研究，为全方位、多方面揭示HBx致HCC机理提供更多的理论依据，尽可能发现先前互为矛盾的真谛所在，并采取有针对性的研究措施，为以后研究HCC的致病机理取得更进一步的突破。为此，本实验通过脂质体转染将HBx基因导入Bel7404细胞中，通过G418筛选获取阳性克隆，并进行RTPCR和Western blot检测HBx mRNA和HBx蛋白的表达情况，实验结果表明在转录水平和翻译水平均有HBx的表达，表明稳定表达HBx的转基因细胞模型Bel7404/HBx构建成功。在此基础上用MTT检测了Bel7404/HBx 、 Bel7404/pcDNA3.1和 Bel7404细胞的增殖情况，结果发现Bel7404/HBx的生长速度远远高于其它两组细胞，这些说明HBx具有促进细胞增殖的作用。进一步通过流式细胞仪分别检测Bel7404/HBx 、 Bel7404/pcDNA3.1和 Bel7404细胞周期特点和凋亡情况，结果显示，Bel7404/HBx细胞凋亡率较低，只有（2.97±0.01）%，而其它两组对照组细胞Bel7404/pcDNA3.1和Bel7404的凋亡率较高，分别达到（9.58±0.01）%和（12.64±0.02）%，具有显著性差异（P<0.05），细胞周期中Bel7404/HBx在G1期比例下降，S期与G2期所占的比例增高，这说明HBx可能有加速细胞周期，促进细胞生长，抑制细胞凋亡的作用。由此可以推断,HBx可促进细胞DNA的复制,加速细胞周期的进程,与大多文献报道相一致［9-12］,所有这些表明, HBx对Bel7404肝癌细胞影响极大,可能对肝细胞癌恶性程度、转移等产生重要的影响,这对进一步研究HBx致HCC的确切机制,探索HCC新的防治策略具有十分重要的启示。
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【参考文献】略
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