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一、实验目的

    了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。
 

二、实验原理

    培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。

    牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。

    干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。

三、试剂与器材

1. 器材 试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。
2. 试剂 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂

四、实验内容

1. 称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查
2. 干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物
3. 高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查
4. 过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

五、关键步骤及注意事项

1. 要严格按配方配制。
2. 调pH不要过头。
3. 干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70ºC以下放物、取物。
4. 高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。
5. 过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快，滤膜要注意清洗保存。