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血肌酐测定是肾功能检测的重要常规生化指标。Jaffe氏反应是最常用的肌酐检测方法。但血清中胆红素的干扰使测定结果偏低是一个长期存在的问题。为此，众多临床化学家进行了多方面的探讨，至今尚无满意的解决方法。我们通过参考有关文献，结合实际工作，对消除胆红素在血肌酐测定中的负向干扰问题进行了深入探讨。发现在日立7150自动生化分析仪上利用高铁氰钾的氧化性，可使胆红素转化成胆绿素，从而达到消除其负向干扰的目的。 一、材料与方法 1.胆红素标准：日本进口。 2.苦味酸试剂：苦味酸17.2 mmol/L，加30%Brij-35 2.0 ml/L，在室温稳定三个月。 3.碱性试剂：NaOH 250 mmol/L水溶液。 4.结合苦味酸试剂：配制碱性试剂/苦味酸试剂5∶1(体积)在4℃条件下稳定一周。 5.高铁氰钾试剂：含K3Fe(CN)62.0 mmol/L 0.9% NaCl水溶液。4℃稳定4天。 6.方法：15 μl血清与20 μl(试剂1)高铁氰化钾试剂反应5分钟，加280 μl结合苦味酸试剂(试剂2)反应60秒后连续监测未来60秒吸光度变化，求其浓度。主波长505 nm，付波长600 nm。 二、结果与讨论 1.两种方法的比较：选取胆红素和肌酐正常参考值范围的血清，配成非黄疸混合血清，并用苦味酸法平行测定肌酐浓度20次，平均值为101 μmol/L，再取一定量的此血清，溶解胆红素标准，配成(30～600 μmol/L)不同浓度的胆红素混合血清。在日立7150自动生化分析仪上用高铁氰化钾法和苦味酸法进行肌酐测定。苦味酸法测定结果随着胆红素浓度的增加肌酐浓度明显降低。测定范围在98～46 μmol/L。而高铁氰化钾法黄疸对其影响不大与混合血清肌酐定值(101 μmol/L)接近。测定范围在107～90 μmol/L。 2.方法的精确性：本方法批内变异系数(CV)为1.21%～1.50%，批间CV为1.30%～1.72%，平均回收率为101.7%。 3.笔者在日立7150自动生化分析仪上建立的高铁氰化钾法，其测定原理是利用高铁氰化钾的氧化性，把胆红素转化成胆绿素，从而消除对肌酐测定的影响。在高铁氰化钾浓度的选择上以2.0 mmol/L为合适。因浓度过低，胆红素转化成胆绿素不彻底使肌酐浓度偏低。反之结果偏高。该方法具有快速、简便、准确等优点，可做为日常工作中对消除胆红素在肌酐测定中负向干扰的理想方法，值得推广应用。 |