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溴甲酚BCG紫法测定血清白蛋白

时间:2010-11-13 18:39来源:幸福检验 整理 点击:

 长期以来,溴甲酚绿(bromcresol green,BCG)染料结合法测定血清白蛋白(Albumin,ALB)广泛应用于临床,国内大多数医院目前仍然沿用这一方法,但该法会因BCG与非白蛋白类蛋白质结合而受到非特异性干扰。近年有外国公司推出了溴甲酚紫(bromcresol purple, BCP)法测定血清白蛋白的商品化试剂,国内已经有部分医院引入相应的仪器和试剂并逐年增多,但对BCP测定白蛋白的结果却未见完整评价。在临床实际工作中,用这两种方法测定血清白蛋白的结果可有较大差异,对一些需要对白蛋白准确定量的病人的诊治造成一定的困扰。本试验特对BCP测定白蛋白的方法作一评价,并对其与传统BCG法的差异作一比较。

 
1材料和方法
1.1仪器与试剂 DADE BEHRING Dimension RXL型与Dimension RXL专用密闭ALB试剂(批号EJ2235);OLYMPUS AU800型全自动生化分析仪、日本WAKO ALB试剂(批号DJ326)。ALB标准品 采用Dimension TP/ALB Calibrator(批号1GD024)和Olympus System Calibrator(批号105E);质控品采用美国DADE Moni-Trol Chemistry Control(批号EM2-0312)。
1.2原理 在pH4.9醋酸盐缓冲液中,溴甲酚紫与白蛋白结合形成绿色复合物,在600nm波长处的吸光度与白蛋白浓度成正比,与同样处理的白蛋白标准比较,可计算样品血清中的白蛋白浓度。 
1.3方法 取Dimension TP/ALB Calibrator的中间水平42g/L作标准,以两管去离子水作为0 g/L的标准对RXL进行假三点定标,随后测定83 g/L、72.63 g/L、62.25g/L、55.33g/L、42g/L 28g/L、21g/L、14g/L、10.5g/L、5.0g/L共十个浓度的ALB标准溶液及其吸光度,制作标准曲线;收集30ml新鲜混合血清用Dimension RXL进行批内和批间精密度试验。另收集100份门诊就诊者血清,用System Calibrator对AU800的ALB进行定标后,两台生化分析仪同时进行ALB检测。
 
2结果
2.1标准曲线 用RXL全自动生化仪检测上述十个不同浓度的ALB标准液的吸光度,以ALB浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标,绘制校正曲线。结果表明ALB浓度在5.0~83g/L之间,线性关系良好,相关系数为1.000,回归方程式:y=0.234X-11.588。
2.2精密度 收集30ml新鲜混合血清(无明显溶血、脂血、黄疸者),分成60份,取30份上RXL连续分析,求得 =42.76g/L,SD=0.418,批内变异系数为0.95%;另30份混合血清样品置-20℃冰箱冷冻保存,每日早晚各测定一次,共计15d ,测得其 =41.92g/L,SD=1.27,批间变异系数为3.03%。
2.3回收率 取一份新鲜血清分装为4管,每管900μl,RXL测定其中1管ALB浓度为39.70g/L,另3管分别加入14g/L、42g/L、83g/L的ALB标准液100μl,测得回收浓度分别为1.36 g/L、4.30 g/L和8.20 g/L,回收率分别为97.1%、102.4%和98.8%,平均回收率为99.4%。
2.4干扰试验 取一份新鲜血清,测定其ALB为41.2g/L。将胆红素纯品配成378μmol/L的溶液,将血清样品与胆红素溶液按9:1、2:1、1:1、1:2的比例进行混合,然后测定ALB含量。结果表明,252μmol/L的胆红素对BCP法测定ALB无影响。血清样品与20%的Trilitid按6:1、4:1、3:1混合,结果显示,Trilitid浓度为2.9%和4.0%时对测定结果无明显影响,浓度达5%时会产生7.76%的正干扰。溶血标本血红蛋白≤4.0g/L时对测定无明显干扰。
2.5显色稳定性 ALB可与BCP进行即时完全反应,不受时间和温度变化的影响,反应后吸光度可稳定1h以上。
2.6方法对比试验 用本法(X)和BCG法(Y)分别测定100份门诊就诊者血清ALB,经统计处理,其回归方程为y=1.08x+5.98,r=0.929,经SPSS软件统计其F=364.84,P<0.001,两种方法测定结果显著相关。将两种方法测定100份样品的结果进行配对t检验,t=38.29,P<0.001,两种方法测定的结果有显著性差异。但将BCP法的测定结果经回归方程换算后,两法结果非常接近。
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