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第5步：为了除去血浆中其它物质的干扰，在反应膜上只保留BAP结合蛋白复合物，在反应膜上再滴加两滴洗涤液(小儿型)或中止液(成人型)，此时液体渗入较快。
第6步；推动反应滑板，使反应膜定位在反应孔的正中，此步骤使亲和反应和酶促显色反应在两个不同的区域进行，以避免亲和反应对显色反应的干扰，提高检测灵敏度和特异性。
第7步；在反应孔正中滴加一滴显色液，置37℃恒温水浴箱中按说明书上标明的反应时间进行保温反应。滴加显色剂时，应先将显色剂平衡至室温。注意：反应温度指的是水浴箱内的气温，而非水的温度；且反应装置应放在试管架或别的支架上，切勿将反应装置放在水中进行反应，放时也要注意避免反应膜上溅上水滴。显色液正常的颜色为淡黄色，在2-8℃避光条件下可稳定一年，如变蓝或变成无色，可能是运输过程中外界因素的影响所致，对检测结果有一定影响，请勿使用并及时与供应商或公司技术服务部门联系。
第8步：显色结束后，将反应滑板推回原位，此时反应膜上剩余的显色液将会被吸收掉，之后滴加一滴中止液，停止酶促显色反应。因为显色反应时间已经出厂前校正确定，故实际显色时间与说明书上标明的显色时间应尽可能接近。
第9步：试剂盒使用的显色系统是BCIP／INT，显色产物是一种蓝紫色色淀。正常小儿血浆BAP活性一般≤200U／L,~E常成人血浆BAP活性一般≤150U／L，钙营养不良者血浆中BAP活性升高，随钙缺乏程度不同，反应膜上显色强度不同。报告时，对照标准色板报告：
小儿：≤200U／L，250U／L，300U／L。如显色偏离标准色板标明的数值，则可据目测实际报告为200-250U／L,250-300U／L或>300U／L；
成人：≤150U／L，200U／L≤200U／L。如显色偏离标准色板标明的数值，则可据目测，实际报告为150-200U／L，200-250U／L或>250U／L。
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