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连续监测法中，要注意双波长测定有两种类型的机型：主波长全程监测副波长单点监测，和双波长全程监测。不仅因为后者的准确性优于前者，而且因为酶活性测定的K值计算与波长及摩尔吸光系数有关，更显重要。 副波长单点监测：试剂和样品混合后，双波长只测一点，此后只用主波长连续监测；计算时，全部x主吸光度值均减去同一λ副吸光度值。K值计算代入主波长摩尔吸光系数即可。机型如Monarch1000，TechniconRA1000等。 双波长全程监测：全程每～测定点均用双波长同测，并各自用λ主吸光度值减去λ副吸光度值。因为所测指示酶或产物在λ副波长时也存在一定的吸光系数，K值计算代入的摩尔吸光系数值应采用ε主减去ε副。如NADH的ε为6．22×10，为1．33×10，ALP产物ε为18.5x×10，ε为0.2×10很小；GGT产物在副波长处无吸光系数。 |