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1．仪器特点比如，半自动生化仪多为流动比色池，要考虑泵速、进样管长短、反应液黏稠度及混合情况，以及室温、反应液温度同反应要求温度间的温差等。全自动生化仪的测定读数设置方式不同，直接以“秒”设置，或以测定点设置、测定点间隔时间不一样，需要灵活掌握。 2．试剂及方法学 (1)试剂组成在酶活性的连续监测法时，若试剂含工具酶数量多、偶联反应多，则激活反应时间一般较长，延迟时间也较长，如肌酸激酶(NAC法)延迟时间常设置120-180秒；若试剂中底物经待测酶催化，其产物可以直接测定的，则延迟时间较短，如-谷氨酰转移酶(GGT)设定30-60秒。同一项目同一方法，但试剂配方不同，其反应快慢等特征也可能不同，如白蛋白测定。白蛋白与溴甲酚绿(BCG)为即时反应，10秒钟内已完成，其后球蛋白等也将与BCG发生反应，所以孵育时间不能延长。但在同一测定时间，BcG浓度、缓冲液种类、pH和表面活性剂不J司的试剂，测定结果可能差异明显。 (2)样品异常成分干扰有的试验项目需要用工具酶将内源性代谢产物耗尽，比如丙氨酸氨基转移酶活性测定试剂中须有足量的乳酸脱氢酶(LDH)。如果使用单试剂，正常血清样品延迟时间60秒即可；但当内源性酮酸增多(如酮症酸中毒)时，试剂内LDH常常不能在60秒内完全将其清除，剩余酮酸会进入监测期干扰测定，使测定结果偏高，所以延迟时间应增至90～120秒。采用双试剂，则可在加入R1后即进入预孵育期。 (3)方法学要求比如肌酐(Jaffe法)测定的特异性不强，一般认为反应前20秒左右为乙酰乙酸等快反应干扰物呈色，后约80～100秒为蛋白质等慢反应假肌酐呈色，20~60秒肌酐呈色反应占主导地位。采用两点法或速率法可减少干扰，但具体取多长的延迟时间，应根据试剂和仪器读数特点，以干扰试验等方法来评价决定。 3.工作程序要在保证准确性的前提下，合理设置参数，提高工作效率。最突出的例子是半自动生化仪上酶活性连续监测法的延迟时间设定。由于只能单份样品逐一测定，若延迟时问全部设置在仪器内，每个延迟时间加监测时间至少1分钟以上，守候时间较长。工作量大时，可以根据仪器控温、加样及读数和试剂特点，以及室温情况，将延迟时问挪一部分到机外，套式操作，但要确保机内延迟时间不要进入线性反应期。 4．要兼顾延迟时间和监测时间反应时间是有限制的。在速率法和两点法中，延长延迟时间必然缩短线性监测期，减少测定的线性范围，也易发生底物耗尽。 三、样品量、试剂量与稀释量 有关参数包括样品量、试剂量、稀释水量、最小反应体积和最大比色杯容量等。如HITACHI7170反应体积180~380µl，最大体积570µl。BT224半自动生化仪流动比色池容积33µl，吸液量200～990µl，最适体积500µl。 1．最小反应体积在仪器光度读数要用于结果计算时，反应液液面高度不低于光度计光径的最小体积。它保证仪器的正确读数和计算，也是仪器测定精度和经济性的指针之一。在有的仪器中，它以反应体积的下限表示，有的则专门标明最小反应体积。在单试剂测定中，样品与试剂的总体积不得少于此参数。在双试剂测定中，若R1与样品的反应读数不纳入结果计算。R1自勺加液量可不考虑此参数，如连续监测法；否则应考虑它对结果的影响，如终点法在加R2之前读数，并以此来扣除试剂或样品空白时。 |