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由于血清中胱抑素C浓度较低，故其测定方法需较高的分析灵敏度及特异性。Lofberg等首先用单向免疫扩散法（RID）及酶免疫测定法（EIA）对胱抑素C含量进行测定，按照目前的标准，当时报道的这两种方法不仅费时，而且检测限也差（分别为300、30μg/L）。随后，又有较简单且更灵敏的放射、荧光及各种酶免疫测定（RIA、FIA及EIA）的方法报道，以改善胱抑素C测定的可靠性。 1993年Pergande等[3]报道了一种夹心酶免疫测定方法，其检测限虽然很低（0.9μg/L），但测定时间仍较长，无法常规应用，更无法用于急诊测定。以上各种测定方法均属非均相测定方法，很难自动化，因此限制了胱抑素C的广泛临床应用。胶乳免疫测定是一种均相测定方法，在胶乳颗粒上包被抗体，与抗原结合时颗粒发生凝集，此方法很容易自动化。Kabanda等于1994年报道的测定胱抑素C的胶乳颗粒凝集法是一种颗粒计数免疫测定法[8]。Kyhse andersen等[6]于同年报道了一种颗粒增强透射免疫比浊法（particle-enhanced turbidimetric immunoassay, PETIA），使胱抑素C测定的时间缩短至5min左右，且可在自动生化分析仪上进行，使胱抑素C测定的常规应用成为可能。随后，Newman等也报道了类似方法[9]。1997年，Finney等报道了一种能快速自动测定胱抑素C的颗粒增强散射免疫比浊法（particle-enhanced nephelometric immunoassay, PENIA），其测定结果与PETIA法相关性良好[10]。各种胱抑素C测定方法的比较见表1。 从表1可见，单纯就检测灵敏度而言，RID法最差，而EIA、RIA及FIA法[11～14]均优于PETIA及PENIA法。由于RIA法存在放射性污染，FIA法需昂贵的仪器，以及RIA、FIA、EIA法测定时间长，且不能全自动化，无法用于临床大批量标本的测定。PETIA及PENIA法虽然检测灵敏度差些，但仍可达150μg/L左右，远远低于健康人血清胱抑素C浓度的下限值，可满足临床需要；这两种测定方法基本上不受血红蛋白、胆红素、类风湿因子、甘油三酯的影响，回收率可达95%～109%，批内及批间变异系数均较小（＜4.5%）；加上这两种方法可全自动化，故在血清胱抑素C测定的常规临床应用中可首选PETIA或PENIA法。 各位研究者所报道的血清胱抑素C浓度的参考范围有一定的差异，这一方面是由测定方法不同所致，另一方面与所用胱抑素C标准品的来源不同有关，现应用的胱抑素C标准品有3种类型：①从人尿中纯化的胱抑素C；②纯化的人类胱抑素C，并用重组胱抑素C定值；③重组胱抑素C，并溶于马血清。Pergande等用一种尿蛋白标准品，发现血清胱抑素C浓度存在性别差异，其它研究者利用其它标准品时未发现性别差异。因此，应制定有关标准品制备的统一标准，以便进行方法比较及参考范围的建立。 4 小结 在肾脏疾病治疗中已涌现出许多新方法，如抗炎药物、肾移植及透析等。在应用这些方法的过程中，肾移植后排斥反应的监测及肾毒性药物肾毒性监测等。均需一种快速、简单且能准确地反映GFR变化的指标[15]。无论从理论上还是实践中，血清胱抑素C的测定均优于血清肌酐的测定，加上能自动化的检测的PETIA及PENIA方法的建立，已使胱抑素C的广泛临床应用成为可能。在今后的实践中，应注意测定方法的标准化问题；观察血清胱抑素C浓度在不同肾脏疾病状态下的变化规律；应在更大的人群内测定血清胱抑素C浓度，以分析是否存在年龄及性别相关的差异；从而最终确定胱抑素C的敏感性及特异性。 |