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仪器与试剂 ２、试剂：美国BECKMAN公司ALP试剂盒，批号：M510029。 方法 １、观察试剂颜色：将ＣＸ５ＣＥ报告“空白吸光度过高”的试剂从仪器试剂架上取下，观察Ａ、Ｂ两孔试剂的颜色（Ｃ孔无试剂），并与符合要求的新试剂比较。 ２、仪器能接受的Ｂ孔试剂颜色深度：向Ｂ孔试剂中加入蒸馏水作不同比例稀释，蒸馏水加入量分别为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml，再分别上机试验，以分析仪刚好不提示空白吸光度过高的稀释度作为最佳稀释比例。取最佳稀释比例的试剂，再用蒸馏水作２０倍稀释，然后在ＢＴ－２２４生化分析仪上，以蒸馏水为零点，波长405nm，光径１cm，测得吸光度Ａ值。 ３、准确度试验：取符合要求的新试剂和已作最佳比例稀释的试剂，平行测定30份临床标本（内含有高中低不同ALP活性的标本）和BECKMAN随机质控液。 ４、高活性标本对比试验：将三份高活性的ALP血清标本，分别用正常试剂和经最佳比例稀释后的试剂上机测定，每份标本各测三次。 ５、精密度试验：批内变异取ALP活性分别为730IU/L和80IU/L的标本各一份，用最佳比例稀释试剂同时测定20次。批间变异取ALP活性分别为510IU/L和70IU/L的混合血清分装冰冻保存，每天取出一支用最佳比例稀释试剂测定ALP活性，连续10天。 结果 １、ＣＸ５ＣＥ报告“空白吸光度过高”的试剂与符合要求的新试剂比较，Ａ孔试剂无色透明，与新试剂一致，Ｂ孔试剂的黄色明显深于新试剂。仪器报告空白吸光度过高就是由于Ｂ孔的黄色过深所致。 ２、最佳稀释比例在蒸馏水加入量为1.5～2.0之间，Ｂ孔的原始试剂体积为６ml，则蒸馏水：试剂的稀释比例为１：３～１：４。经最佳比例稀释的试剂再经20倍稀释后，在ＢＴ－２２４分析仪上测得Ａ值为0.24～0.31之间，而未经最佳比例稀释的空白吸光度过高的试剂，再经20倍稀释后测得Ａ值在0.32～0.41之间。初步认为如果Ｂ孔的黄色深度控制在本实验条件下Ａ值最高不超过0.31，则仪器接受并可得出实验结果，如Ａ值超过0.30仪器就可能报告空白吸光度过高，试剂无法使用。 ３、准确度：30份临床标本用两种试剂测得结果一致，经ｔ检验，P＞0.2。贝克曼随机质控液测定结果，两种试剂都在允许误差范围之内。 ４、高活性标本对比试验：正常试剂测得的结果为725IU/L，最佳比例稀释试剂为731IU/L，结果一致。 ５、批内变异高低活性标本CV分别为1.68％和2.23％，批间变异CV分别为2.76％和4.01％。 讨论 BECKMANALP试剂采用磷酸对硝基苯酚法。反应原理是：无色的磷酸对硝基苯酚＋水在37℃pH10.3有镁离子存在的条件下，经ALP作用产生黄色的对硝基苯酚＋磷酸，根据对硝基苯酚的产生速率可计算出ALP的活性。Ａ孔中为含有缓冲盐、二乙醇胺和氯化镁的无色混和液，Ｂ孔为磷酸对硝基苯酚底物。磷酸对硝基苯酚性质不稳定，随着贮存时间的延长颜色逐渐加深（产生黄色的对硝基苯酚），致使因空白吸光度过高，分析仪不出结果。BECKMAN仪器为保证分析结果的可靠性，每次定标时先检测空白吸光度是否在规定范围之内，如超过即报警。但由于进口试剂在运输途中多次装卸，有时冷藏效果不好，Ｂ孔颜色颜色加深增快，因而试剂有效时间未到，但与不能使用。根据以上原理，我们认为在实际工作中如果Ｂ液颜色不是太深，可以考虑将Ｂ孔用蒸馏水作适当稀释，便可做出完全符合临床要求的结果。我们对Ｂ孔加水量的多少进行了试验，根据以上实验结果可以认为，在上述实验条件下，Ｂ孔吸光度在0.41以下时，可以进行加水稀释，结果与正常试剂一致；加水量可以控制在使Ｂ孔试剂吸光度在0.29～0.31之间较为合适。运用此种措施节省了大量试剂，但亦为权宜之计。临床工作中应密切注意质控情况，以确保结果的可靠性。 |