职称考试资讯综合基础知识 临床职称类 医学检验士 医学检验师 主管检验师 在线职称考试
返回首页

免疫细胞分离及检测技术试题及答案参考(4)

时间:2010-11-14 13:15来源:幸福检验 整理 点击:
2.SmIg是B细胞表面的膜免疫球蛋白,是B细胞特有的表面标志,是鉴定B细胞可靠的指标。
五、简答题
 
1. 从PBMC中分离淋巴细胞的方法有:(1)贴壁粘附法;(2)吸附柱过滤法;(3)磁铁吸引法;(4)Percoll分离液法。
 
2. B细胞抗体分泌其功能检测方法有:(1)检测血清中各抗体水平;(2)反向溶血空斑试验;(3)酶联免疫斑点试验。
 
3. NK细胞主要功能是非特异性直接杀伤肿瘤细胞的功能,常用来检测NK细胞功能的方法有:(1)酚释法;(2)放射性检查法;(3)荧光分析法。
 
4. T细胞受PHA或其他刺激物刺激后将发生一系列形态变化,取培养细胞作涂片染色,
 
镜检可见后淋巴细胞、过渡性淋巴母细胞和未转化的淋巴细胞,其中后淋巴细胞和过滤性淋巴细胞统称为转化淋巴细胞,未转化和转化淋巴细胞其形态特征见下表:
 
转化的淋巴细胞
原淋巴细胞 过渡型
细胞大小(直径μm) 12-20 12-16 6-8
核大小、染色质 增大、疏松 增大、疏松 不增大、密集
核仁 清晰,1-4个 有或无 无
有丝分裂 有或无 无 无
胞质、着色 增多、嗜碱 增多、嗜碱 极少,天青色
浆内空泡 有或无 有或无 无
伪足 有或无 有或无 无
 
5.淋巴细胞活力是指活淋巴细胞占总淋巴细胞的百分比。活力的测定通常使用的方法是台盼蓝染色法。该染料不能透过活细胞细胞膜,故活细胞不染色,死亡细胞呈蓝色,观察计数200个细胞,计算不着色细胞的百分率及代表细胞的活力。 
 
六、论述题
 
1. T细胞转化实验是检测T细胞免疫功能的经典试验,基本原理是采用T细胞敏感的刺激物在体外刺激T细胞,T细胞受到刺激后将发生增殖、转化,根据其增殖转化的功能评定相应的细胞功能。
 
淋巴细胞的转化情况评定有形态法和放射性核素法:
 
形态法利用淋巴细胞受刺激物作用后,将出现细胞形态方面的改变,取培养物标本涂片可见原淋巴细胞、过渡型淋巴母细胞和未转化淋巴细胞,其中前二者计为转化的淋巴细胞,每份标本计数200个细胞,计算淋巴细胞转化率:
 
淋巴细胞转化率=转化淋巴细胞/(转化淋巴细胞+未转化淋巴细胞)×100%
 
正常情况下,健康人外周血经PHA刺激的淋巴细胞转化率为60-80%,小于50%可视为降低。
 
放射性核素法为在细胞培养的S期加入H3-TdR,后者即掺入到新合成的DNA中,其掺入的多少可由细胞内反射性强度表示出来,根据掺入的多少可推测细胞的增殖程度,转化能力通常以刺激指数(SI)表示,SI=PHA刺激管cpm均值/空白对照cpm的均值,一般认为SI应大于2。
 
MTT比色法,利用MTT在活细胞线粒体琥珀酸脱氢酸作用下被还原呈蓝色的MTT-甲簪,形成的量与增殖程度呈正相关,通过比色法测OD值,以刺激指数作为判断淋巴细胞转化率的指数。
 
2. Ficoll分离液是聚蔗糖-泛影葡胺混合物,具有对细胞无毒,基本等渗等特性,按一定比例将两者混合使其比重在1.077左右,而外周血单个核细胞在1.076-1.090之间,红细胞1.093,粒细胞1.092,血小板为1.030-1.035。分离时先将分层液置试管底层,然后将肝素抗凝全血以Hanks液稀释后,叠加在分层液上面,使两者形成Y一清晰界面,离心后,离心管中会出现几个不同层次的液体和细胞带,单个核细胞密集在血浆层和分离液的界面中,吸取该层细胞经洗涤、离心、重悬后即为PBMC。
 
分离PBMC是应注意:
 
1、使用新鲜抗凝血;
 
2、注意无菌操作;
 
3、加血液至分离液上时,避免破坏其界面;
 
4、在收集单个核细胞时,沿管壁轻轻旋转吸取细胞,要求操作者手法要轻、稳、准;
 
5、实验中的细胞获得率与室温及分离液的比重有关,室温超过25℃时,可影响细胞获得率。
顶一下
(0)
0%
踩一下
(1)
100%
------分隔线----------------------------
发表评论
请自觉遵守互联网相关的政策法规,严禁发布色情、暴力、反动的言论。
评价:
表情:
用户名:密码: 验证码:点击我更换图片
赞助商链接
推荐内容
赞助商链接
考典推荐
赞助商链接