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6.酶联免疫吸附试验（ELISA）及生物素-亲合素酶联免疫吸附法（BA-ELISA）应用完整精子或精子膜抗原包被固相载体，待测样本中精子抗体与之培养后可结合于抗原表面。随之酶标第二抗体亦可结合其表面，后经加酶底物，根据底物显色情况判断结果。可用肉眼观察，亦可用酶标仪测定，后者客观准确，一般以大于一组阴性血清光密度均值加2倍标准为阳性。由于完整精子包被易致非特异性吸附，因此若以可溶性精子膜抗原包被，则本法敏感、特异、客观、定量，能确定抗体类型，且易操作。BA-ELISA是在常规ELISA基础上发展起来的新一代定量检测法，其敏感法性、特异性超过常规法。 7.免疫珠试验（Immunbead Test,IBT） 用抗人免疫球蛋白抗体包被的聚丙烯酰胺微能结合于结合了精子抗体的精子表面，在相差显微镜或电子显微镜下可见到免疫珠随精子运行，若结合一个或多个免疫珠的精子比例>=10%为阳性。此法可确定抗体的部位、类型及结合精子的比例，能测出活精子表面结合的抗体。其敏感性、特异性及重复性较好，操作稍繁琐，检测所需样本少，可用于宫颈粘液、输卵管液等微量样本的检测。 8.放射性标记免疫球蛋白或A蛋白法 同位素标记的抗人免疫球蛋白或葡萄球菌A蛋白与结合在精子表面的精子抗体结合，用X计数器测定精子表面的放射活性。若以活精子作为抗原其特异性及敏感性较高，且可确定抗体类型。但由于每次实验活动精子来源不同，其结果重复性较差；且设备昂贵，操作者易受放射性损害，故此法报道较少。 9.间接免疫荧光试验 精子表面结合于抗原后，能与标有荧光素的第二抗体结合，在荧光显微镜下观察呈现荧光的阳性精子比例。因试验中需要甲醇固定致精子膜损伤，内部抗原外露，而抗内部抗原的抗体在正常人中普遍存在，故假阳性太，无临床实用价值。近年来，作液相培养，实验过程中无需固定，又重新确定了本法的使用价值。 10.精卵相互俢直接检查法 （1）精子-透明带结合或穿透试验：自腹腔镜检查中获得的人卵与精子在一定条件下孵育后，观察精子能否穿过透明带进入细胞周围的空间，若精子不能穿过透明带，考虑有制动抗体存在，此试验亦受其它因素干扰。 （2）精子-去透明仓鼠卵穿透试验（SPA）：将优化提取的的活精子与无带仓鼠卵混合孵育，在相差显微镜下观察，若卵内含肿胀精子头（带尾）为已经穿透。SPA可用于判定：①有精浆抗体的精子的受精能力；②各种抗体在阻止受孕时的重要性。此试验也可受多种因素影响。 （二）抗精子细胞免疫的检测 对细胞介导的抗精子免疫的研究资料较少，各家结论不一。动物实验及人体检测表明，抗精子细胞免疫可可甬不育的原因之一。 检测细胞介导抗精子免疫反应的试验主要有淋巴细胞转化试验、白细胞粘附抑制试验、白细胞或巨噬细胞移动抑制试验、皮肤试验及外周血白细胞促凝血活性法等。所采用的抗原不一，有新鲜洗涤精子、冻融精子、半纯化精子等。目前，因使用的抗原不统一，检测方法各异，研究倒数较少，各种方法的特异性尚难评价，其结果亦难于比较。 |