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HiCN法测定血红蛋白(HGB)是国际血液学标准化委员会推荐的参考方法。其测定原理是：HGB被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白后，再与氰离子结合形成稳定的氰化高铁血红蛋白(HiCN)，在540 nm波长处HiCN具有特异的吸收峰，可用分光光度计进行测定［1］。但当标本量较大时，用分光光度计比色却相当费时。为此我们通过试验，在自动生化分析仪上实现了检测自动化。 1 材料与方法 1．1 材料 1．1．1 标本 采自温州市某重点小学1年～6年级共1 400名学生。 1．1.2 仪器 采用日立7170A全自动生化分析仪及希斯美康SE-9000五分类血液细胞分析仪和原装试剂。血液细胞分析仪采用新鲜血校准品进行校准。 1．1．3 试剂 血红蛋白转化液即HiCN试剂原液(浓10倍)。 1．2 方法 1．2．1 标本准备 1.2．2 仪器准备 7170生化仪参数设置：一点终点法，波长546 nm，标本量(即以上溶血液)12 μl，试剂量(试剂即为蒸馏水)200 μl；标准品：将SE-9000所测HGB浓度为160 g／L的血液标本，按上述1.2.1法进行准备，以HiCN试剂原液为空白进行定标。 1．2．3 线性试验 取一高HGB浓度的EDTA抗凝血标本，分别吸取20 μl、15 μl、10 μl、5 μl加入到0．5 ml HiCN试剂原液中，配成4／4、3／4、2／4、1／4四个浓度梯度的标本，每个浓度做3管，用7170生化仪测定。 1．2．4 对照试验 取SE-9000所测不同HGB浓度的10个标本，在7170生化仪上测定。 2 结果 2．1 线性试验 本法HGB浓度在65 g/L~240 g／L范围线性良好，结果见图1(r=0.997 9)，其回归方程：Y=232．4X+13．833。 2．2 对照试验 10例不同HGB浓度标本经与SE9000比较，结果见图2，其回归方程：Y=0．7 795X+26．693，r=0．9 905。 2．3 脓度范围 用本法测定1 400名小学生HGB浓度范围为(128．28±13．29)g/L，剔除3 s后为(128．31±12．22)g/L。 3 讨论 HiCN法检测HGB是国际血液学标准化委员会推荐的基准方法。其测定步骤是：在常规的HGB测定过程中，HiCN原液首先进行10倍稀释，然后取其5 ml用于对标本的检测。当20 μl末梢血液加入后，HGB很快被转化成高铁血红蛋白并与氢离子结合形成稳定的HiCN，用分光光度计测定540 nm波长的HiCN吸光度即可计算其HGB浓度［1］，但在大批量的HGB普查中，手工比色、结果计算等均较繁琐，不仅劳动强度大，而且容易出错。而血液细胞分析仪测定HGB，虽然解决了自动化问题，但检测速度仍然不能如愿。为此，我们分析了全自动生化分析仪用于HiCN法HGB测定的可行性。 从线性试验和对照试验可以看出，7170生化仪用于HGB测定在65 g/L~240 g/L浓度范围内线性良好，其与SE-9000所测HGB结果一致(r=0．997 9)，因此认为：用生化仪进行HiCN测定不仅实现了比色和计算的自动化，而且极大的提高了工作效率。我们用不到2 h的时间完成了1 400例标本的检测，并取得令人满意的结果。 参考文献： ［1］陆永绥，张伟民．临床检验管理与技术规范［J］．浙江：浙江大学出版社,2004：62． (解放军第一一八医院，浙江 温州 325000) |